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香菇源性成分探針法熒光定量 PCR 試劑盒

發(fā)布時間:2020/11/2 7:55:49      閱讀次數(shù):757

 

香菇源性成分探針法熒光定量 PCR 試劑盒產(chǎn)品及特點

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有香菇的成分。現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù)香菇保守區(qū)域設(shè)計引物和探針,能專一性地檢測出樣品中的香菇成分,但不能檢測其他非香菇成分。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。

5. 快速,整個檢測過程按一個樣品計所需時間僅為 2.0 小時。

6. 對混合樣品中香菇成分的檢測下限為 0.01%,對樣品中香菇成分的核酸檢測下限 0.1ng/µL。

7. 本只能用于科研,足夠 50 次 20uL 體系的熒光定量 PCR。

規(guī)格及成分

 

成分

編號

十孔盒包裝

 

2×Probe qPCR MagicMix

190303

1 mL(棕色蓋)

熒光PCR 專用模板稀釋液

180701

1 mL(黃蓋)

香菇源性成分探針法 qPCR

引物混合液

15-971yw

100 uL(白蓋)

香菇源性成分 qPCR 探針

15-971pb

50 uL(棕色管)

香菇源性成分探針法 qPCR 陽性

對照1×10E8 拷貝/uL

60908-502pc

50 uL(黃蓋)

天凈沙核酸釋放劑試用裝

61202

20 次(1mL,綠蓋)

使用手冊

15-971sc

1 份

運輸及保存

低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較

高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作。

自備試劑

DNA 模板

香菇源性成分探針法熒光定量 PCR 試劑盒使用方法

一、稀釋標準曲線樣品 10E2-10E7 拷貝/μL  6  10 倍稀釋度為例。由于標

準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。

1.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同

3.  7 號管中加入 5  μL 陽性對照濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分

 


 

 

預(yù)變性

95℃

15 min

 

PCR 反應(yīng)

(40 個循環(huán))

95℃

15sec

60℃

60sec(采集 FAM 通道的熒光信號)

五、數(shù)據(jù)處理

11. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值,再推算出其濃度。

12. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct  值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則

為陰性,如果小于 40,則為陽性。


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