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染色質(zhì)免疫沉淀分析

發(fā)布時(shí)間：2021/5/10 8:49:23      閱讀次數(shù)：426

 染色質(zhì)免疫沉淀分析
（Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChiP）

真核生物細(xì)胞狀態(tài)是由內(nèi)源和外源因素共同影響的，所有信號傳遞途徑的終點(diǎn)都是DNA。DNA通過核蛋白復(fù)合物組成染色質(zhì)，染色質(zhì)基因調(diào)控的一個(gè)重要作用位點(diǎn)。轉(zhuǎn)錄激活因子和輔助抑制因子的研究顯示存在一種新的調(diào)節(jié)機(jī)制 “組蛋白密碼”，其信息存在于組蛋白的轉(zhuǎn)錄后修飾等過程中。該類修飾包括組蛋白磷酸化、乙�；⒓谆�、ADP-核糖基化等過程。隨著越來越多組蛋白核心結(jié)構(gòu)區(qū)域和羧端修飾的確定，組蛋白密碼在控制和調(diào)節(jié)基因功能過程中的作用越來越明確。
參與修飾的酶根據(jù)其作用的不同而分類：如組氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）可以將乙�；鶊F(tuán)轉(zhuǎn)到組蛋白上；組蛋白去乙酰酶（HDACs）可以去除氨基酸上的乙�；鶊F(tuán)；組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（HMTs）可以將甲基基團(tuán)轉(zhuǎn)移到組蛋白上等。不同組氨酸修飾標(biāo)記對應(yīng)于不同的生物學(xué)過程，它可以作為調(diào)節(jié)因子的作用位點(diǎn)，也可以用來改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)。

凝膠電泳遷移率改變分析（EMSA）是目前研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白和相應(yīng)核苷酸序列結(jié)合的常用方法，但是由于許多轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白有相似或相同的DNA結(jié)合位點(diǎn)，這種體外分析獲取的結(jié)果不一定能真實(shí)地反映體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白和DNA結(jié)合狀況。
染色質(zhì)免疫沉淀分析（ChiP）是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來的方法，它能真實(shí)、完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。它是目前確定與特定蛋白結(jié)合的基因組區(qū)域或確定與特定基因組區(qū)域結(jié)合的蛋白質(zhì)的最好方法。
ChiP技術(shù)和芯片技術(shù)的結(jié)合有利于確定全基因組范圍內(nèi)染色體蛋白的分布模式以及組蛋白修飾情況。

甲醛處理使蛋白質(zhì)與DNA交聯(lián)；
超聲波將染色質(zhì)打斷成一定大��；
通過抗體沉淀蛋白質(zhì)－DNA交聯(lián)復(fù)合體；
解除交聯(lián)，純化DNA；
實(shí)時(shí)定量PCR檢測DNA的量


應(yīng)用：
組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標(biāo)記”
轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
藥物開發(fā)研究
有絲分裂研究
DNA損失與凋亡分析

試劑盒組分

  1. ssDNA/Protein A Agarose
  2. ssDNA/Protein A agarose 
  3. ssDNA/Protein G Agarose
  4. ChIP Dilution Buffer
  5. Low salt wash buffer
  6. High salt wash buffer
  7. LiCl Wash Buffer
  8. TE Buffer
  9. 0.5M EDTA
  10. 5M NaCL
  11. 1M Tris-HCl, pH 6.5
  12. SDS Lysis Buffer


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