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客戶細胞培養(yǎng)過程中常見的問題說明

發(fā)布時間:2021/6/17 9:27:32      閱讀次數(shù):581

 通過多次與客戶的了解和反饋,的售后服務(wù)人員發(fā)現(xiàn),客戶在收到經(jīng)過專業(yè)包裝的細胞后,由于沒有經(jīng)過系統(tǒng)專業(yè)的檢查和處理,就直接進行實驗,以致于后期容易產(chǎn)生了一系列問題。鑒于客戶對這一方面的知識有所欠缺薄弱,技術(shù)人員經(jīng)過總結(jié),對于在收到細胞怎樣專業(yè)處理做了以下說明:

       一、問:細胞收到之后怎么處理?

       答:常溫運輸?shù)募毎?/p>

       首先觀察包裝是否完好,瓶口是否漏液,然后顯微鏡先拍攝4x 、10x、 40x不同倍數(shù)下的照片各兩張。放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定兩小時后開始換液,貼壁細胞把培養(yǎng)基全部吸去,加入6ml新的完全培養(yǎng)基,懸浮細胞離心后,用6ml完全培養(yǎng)基重懸細胞。注意細胞的培養(yǎng)環(huán)境。

低溫運輸?shù)募毎,通常是用干冰寄送?/p>

       客戶收到細胞后,觀察干冰是否揮發(fā),細胞是否溶解。沒有問題可以直接放入液氮罐保存(長時間),或者超低溫冰箱(不超過一周)。

        二、問:細胞凍存后,復蘇效果不好?
        答:目前還有很多人采取4°、﹣20°各半小時再轉(zhuǎn)入-80°冰箱,這方法不好控制,有的細胞適合,有的細胞就達不到理想效果。現(xiàn)可采用程序降溫盒來凍存,降溫盒內(nèi)添加的異丙醇可以達到每分鐘降一度的要求,操作也簡單。
       凍存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干細胞可以添加馬血清凍存,另外可以先將凍存液配置成80%血清+20%DMSO,重懸細胞時用血清重懸,避免直接用DMSO對細胞吹打造成損傷。
       三、問:細胞有黑點怎么回事?
       答:這種情況可能性就比較多了,首先判斷黑點是在細胞表面,還是胞質(zhì)內(nèi),還是在細胞外。細胞表面黑點增多可能是因為狀態(tài)變差,可能是培養(yǎng)條件不適合導致,或者細胞活性降低。細胞質(zhì)內(nèi)黑點增多,先確認是否是多核細胞。細胞外有黑點,黑點游動則可能是細菌污染,不游動但隨著培養(yǎng)時間增長黑點數(shù)量增多,應(yīng)該檢測是不是支原體污染,懸浮細胞多數(shù)有黑點,可能是碎片,可低速離心去除。腺癌多數(shù)是分泌因子,看著黑點增多。
       四、培養(yǎng)基,血清怎么選?
       答:最好和細胞來源用的什么品牌使用相同的血清。基礎(chǔ)培養(yǎng)基進口和國產(chǎn)差別不大。專業(yè)的細胞公司使用的血清都是經(jīng)過了大量細胞培養(yǎng)驗證的,不要輕易更換,目前國內(nèi)血清品牌較多,質(zhì)量不齊。
 


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