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pSilent-1質(zhì)粒的操作流程

發(fā)布時間：2021/12/8 10:47:26      閱讀次數(shù)：814

 基本信息：
平臺編號：zl-041505
啟動子:    TrpC
復(fù)制子:    pUC
終止子:    TRPC
質(zhì)粒分類:    絲狀真菌載體；RNAi基因沉默干擾質(zhì)粒
質(zhì)粒大小:    7056bp
原核抗性:    Amp
篩選標(biāo)記:    Hyg
克隆菌株:    DH5a
培養(yǎng)條件:    37度
表達宿主:    絲狀真菌
5'測序引物:    根據(jù)序列設(shè)計
3'測序引物:    根據(jù)序列設(shè)計

收到產(chǎn)品后，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。質(zhì)粒干粉（常溫運輸，存于-20度，90天保質(zhì)期，請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)）（本步驟僅作示例，非該產(chǎn)品的實際步驟）。


 1.收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒；

 2.取1支100ul感受態(tài)于冰上解凍10min，加入2ul質(zhì)粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動，再冰浴2min；

 3.加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩37℃培養(yǎng)49min；

 4.6000rpm離心5min，僅留100ul上清液重懸細菌沉淀，并涂布目標(biāo)質(zhì)�？剐缘腖B平板上；

 5.將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h；（如果菌落過多，請將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果無菌落，請加入10μl質(zhì)粒離心全涂轉(zhuǎn)化）；

 6.挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對應(yīng)抗生素，220rpm震蕩培養(yǎng)14h，根據(jù)實驗需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。


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