養(yǎng)過RAW 264.7細(xì)胞系的小伙伴，都容易為一個問題感到苦惱：它太容易分化了！到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)有哪些，今天我們就給大家分享一些心得。 
 
RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)之基礎(chǔ)篇
RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。
                               

▲產(chǎn)品詳情  細(xì)胞系:RAW 264.7  培養(yǎng)基:CM-0190



▲RAW264.7細(xì)胞生長圖片
 
RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)之進(jìn)階篇1
除了基礎(chǔ)條件，其他外界因素也容易引起細(xì)胞的“小脾氣”，比如運(yùn)輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見的問題，今天來一 一為大家解答。
 
問題1 ：收貨后，細(xì)胞不見了
總是會收到這類反饋：收到細(xì)胞，期待值滿滿地打開包裝準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)，但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞！這是因?yàn)镽AW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，可能會脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。這時候不用擔(dān)心，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200 rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會一個細(xì)胞都找不著。這個時候離心驗(yàn)證是最好的方法。
 
問題2 ：收貨處理后，細(xì)胞不貼壁
將細(xì)胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶里之后，可能會出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1 mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。
 
RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)之進(jìn)階篇2 
正確的傳代方法是RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。RAW264.7細(xì)胞不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)這十幾年里，摸索出一個更不錯的方法：吹打傳代。吹打傳代操作簡單，對細(xì)胞培養(yǎng)的新手們更友好，也能更好地控制細(xì)胞分化率。


傳代步驟：
1)     輕拍幾下培養(yǎng)皿
2)     用1ml的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來（吹不下來的舍棄）
3)     細(xì)胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管
4)     1200rpm （約250g）離心3min
5)     去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞
6)     按比例接種到新的培養(yǎng)皿中


傳代時機(jī)：
1)     當(dāng)細(xì)胞密度較低的時候，可能不太好吹下來。
2)     當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時候，最容易吹下。



▲推薦的RAW264.7細(xì)胞傳代密度


RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)之終結(jié)篇
講了那么多如何處理RAW264.7巨噬細(xì)胞分化的情況，那分化了的細(xì)胞到底是什么形態(tài)呢？
l  分化的細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時常有較長的黑色觸角



▲分化的RAW 264.7細(xì)胞形態(tài)
RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：
1.    我們發(fā)現(xiàn)，RAW264.7巨噬細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；
2.    分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時候千萬不要強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；
3.    吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時RAW264.7細(xì)胞會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打；
4.    培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍
5.    RAW264.7細(xì)胞分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點(diǎn)時間關(guān)心一下它哦~
 
小知識
RAW 264.7細(xì)胞系的起源
加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系。他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒），對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。 [2]