SY5Y)。如今，SH-SY5Y細(xì)胞已經(jīng)是腦科學(xué)研究中最常用的細(xì)胞系之一了。

但很多人在SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，總會(huì)遇到各種問題。今天，來為大家一 一解答。

SH-SY5Y細(xì)胞基本信息

SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方案

收貨篇    

常溫運(yùn)輸過程中，細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。

收貨時(shí)皺縮

常溫細(xì)胞收貨后，把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以靜置過夜（過夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。

收貨時(shí)聚團(tuán)

常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

收貨時(shí)脫落

常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。脫落后的細(xì)胞通常聚團(tuán)漂浮，通過離心將漂浮的細(xì)胞團(tuán)收集起來，在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。

貼壁細(xì)胞常規(guī)方法消化下來，和處理好的脫落細(xì)胞合并，混勻后鋪板。

SH-SY5Y脫落處理步驟：

1.    1200rpm（約250g）3min離心收集細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)基；

2.    PBS 重懸細(xì)胞，再次 1200rpm（約250g）3min離心，去除PBS；

3.    加入 1mL左右 0.25%胰酶重懸細(xì)胞，吹打1-2下吹起沉淀即可；

4.    放入細(xì)胞培養(yǎng)箱約 1-3min；

5.    用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散；

6.    迅速加入 3-5mL含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化；

7.    1200rpm（約250g）3min離心，去除胰酶；

8.    加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無菌培養(yǎng)器皿中；

SH-SY5Y細(xì)胞收貨時(shí)皺縮、脫落

SH-SY5Y細(xì)胞處理后第三天

SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)篇

SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有以下幾點(diǎn)需要注意。

能否使用DMEM/F12

MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)，并且都有相應(yīng)的文獻(xiàn)支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的形態(tài)會(huì)有細(xì)微差異。 另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

培養(yǎng)基容易變黃

因其神經(jīng)母細(xì)胞瘤的特性，SH-SY5Y細(xì)胞成簇生長(zhǎng)，飽和密度大。有時(shí)顯微鏡下看著密度不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，所以細(xì)胞培養(yǎng)基很快就變黃了。這時(shí)候，需及時(shí)換液。

生長(zhǎng)異常緩慢

當(dāng)SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)一周都無法傳代時(shí)，可以將細(xì)胞消化下來，接種到更小的容器中，人為增加細(xì)胞密度，從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。平時(shí)傳代時(shí)也要注意接種密度不能太低。

傳代注意事項(xiàng)

不建議連續(xù)消化細(xì)胞，連續(xù)消化細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，通常1-3min即可，若細(xì)胞解離太快可適當(dāng)用PBS稀釋胰酶。吹打細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作輕緩一些，減少對(duì)細(xì)胞的物理刺激。  

SH-SY5Y正常生長(zhǎng)照片

形態(tài)篇

SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞同時(shí)存在，貼壁細(xì)胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長(zhǎng)，容易成團(tuán)。

懸浮細(xì)胞過多：SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)有少量懸浮細(xì)胞，是正常現(xiàn)象。 如果出現(xiàn)大量懸浮的細(xì)胞，就需要引起注意了。

處理方法：換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集，新鮮培養(yǎng)基重懸后接種回原瓶/原皿。當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、密度適中時(shí)，可以舍棄懸浮細(xì)胞。

成團(tuán)嚴(yán)重：SH-SY5Y細(xì)胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團(tuán)現(xiàn)象。一個(gè)視野下，有少量成團(tuán)現(xiàn)象，無需特殊處理。成團(tuán)幾乎沒有鋪展開的細(xì)胞時(shí)，就需要按以下方法特殊處理一下了。

成團(tuán)較嚴(yán)重的SH-SY5Y細(xì)胞

處理方法

方法1：低密度接種，用0.125%的低濃度胰蛋白酶消化細(xì)胞（時(shí)間不超過5min），按1：6比例傳代接種，并換新的培養(yǎng)器皿。 延長(zhǎng)換液時(shí)間，3天換液一次，防止細(xì)胞脫落。

方法2：使用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)器皿，以加快細(xì)胞貼壁速度，降低細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率。

方法3：重新鋪板，并更換新配制的培養(yǎng)基，并加大血清比例（不超過20%）

方法4：接種時(shí)，減少培養(yǎng)基量（如T25加3mL）以加快細(xì)胞貼壁速度，等待細(xì)胞貼壁后（約8-12小時(shí)），再補(bǔ)加培養(yǎng)基。

預(yù)防成團(tuán)的方法：

Ø  控制細(xì)胞密度不超過80%，當(dāng)密度到達(dá)或超過80%及時(shí)傳代；傳代時(shí)切勿暴力吹打，避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械刺激

Ø  使用質(zhì)量好的細(xì)胞培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的刺激

Ø  請(qǐng)勿頻繁把細(xì)胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時(shí)需開暖氣維持細(xì)胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37度預(yù)熱，以避免溫差對(duì)細(xì)胞造成刺激