發(fā)布時間：2022/8/8 12:15:30 閱讀次數(shù)：517
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號：YX-C-SNAG
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入3mL 丙酮溶解，用不完的試劑仍-20℃保存； 試劑三：液體60mL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，5 mmol/L的對硝基苯酚溶液，4℃保存。臨用前用試劑一將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋50倍得100µmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
產(chǎn)品說明：
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶體中的一種酸性水解酶。其活性變化與機體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
S-NAG分解對硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。
自備實驗用品及儀器：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、30-50目篩（或更�。┖驼麴s水。
操作步驟：
一、樣本處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。二、測定步驟：
1. 分光光度計預(yù)熱30min，波長調(diào)至400nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 加樣表：
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 試劑一（µL） | 550 | 550 | - | - |
| 試劑二（µL） | 50 | - | - | - |
| 混勻， 37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（蓋緊， 防止水分散失），流水/冰浴冷卻。 | - | - | ||
| 試劑二（µL） | - | 50 | - | - |
| 12000g 25℃離心10min，取上清液 | - | - | ||
| 上清液（µL） | 500 | 500 | - | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)品（µL） | - | - | 500 | - |
| 蒸餾水（µL） | - | - |
| 500 |
| 試劑三（µL） | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
| 室溫靜置2min 后，10000g 常溫離心5min，取上清測定400nm處的吸光值A。分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算∆A=A 測定管-A 對照管，∆A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管設(shè)一個對照管。 | ||||
三、S-NAG 活力計算：
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 µmol 對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S-NAG活力（U/g 土樣）＝∆A÷ (∆A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V 反總÷W÷T =1.44× ∆A÷ ∆A標(biāo)準(zhǔn)÷W。
T：反應(yīng)時間，1h=1/24d；V 反總：反應(yīng)體系總體積：6×10-4 L；C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，100µmol/L； W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項：
當(dāng)∆A 大于 1 時，建議將上清液稀釋后進行測定；當(dāng)∆A 小于 0.02 時，建議延長反應(yīng)時間。計算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時間變化。
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