當前位置：首頁>技術(shù)資訊
發(fā)布時間：2022/9/15 10:27:27 閱讀次數(shù)：1406
一、抗原熱修復溫度和時間的關(guān)系
我們?nèi)粘９ぷ髦兴褂玫慕M織固定液福爾馬林會引起組織蛋白內(nèi)或蛋白之間的亞甲基發(fā)生橋連，具體過程如下：
第一步：基本反應(yīng)福爾馬林和氫反應(yīng)形成新的化合物；
第二步：基本反應(yīng)福爾馬林和氫反應(yīng)形成新的亞甲基橋。
上述反應(yīng)的結(jié)果導致許多抗原決定簇被封閉，而加熱可以水解該橋連使抗原被激活。影響抗原熱修復的兩個最關(guān)鍵的因素是溫度和時間，有人將這兩種因素對抗原修復的影響總結(jié)為下面的公式： 抗原熱修復的有效性=加熱溫度（T） × 加熱時間（t）。
也就是說當我們修復時的溫度越低則需要修復的時間就越長；反過來當修復溫度增高時修復的時間可以適當?shù)乜s短，才能使抗原決定簇完全暴露，這種反比的關(guān)系從MBI單克隆抗體的實驗結(jié)果“表1”中也可以清楚地看出。
如果修復強度不夠，免疫組織化學染色所顯示的只能是修復后暴露的部分抗原決定簇，而不是組織所含的全部抗原。這樣的染色結(jié)果可能會非常弱，或出現(xiàn)假陰性，即使是陽性結(jié)果，充其量只能起到定性的作用，不能適應(yīng)今后對免疫組化進行定量的需要。這就給我們診斷中定量指標的應(yīng)用帶來困難，例如用來測定耐藥的指標。
大量的實驗表明，固定時間越長的標本，它所形成的橋連就越緊密，抗原就越難以被激活，所需要的修復強度也就越強。有意思的是隨著固定時間的延長，組織中蛋白對溫度的耐受也相應(yīng)增高，這可能就是我們對固定時間長的標本加大修復強度的理論基礎(chǔ)。
這就提醒我們在做回顧性的研究時一定要注意所使用的修復條件，它與新鮮標本的修復條件一定是有所區(qū)別的，同等條件下一定要加長修復的時間或提高修復所使用的溫度，才可能得到比較滿意的結(jié)果。
抗原熱修復中所使用的修復液pH值也會對染色結(jié)果產(chǎn)生相當大的影響。
pH值對染色結(jié)果的影響大概可以分為以下四種情況：
A.穩(wěn)定型，pH值對染色結(jié)果影響不大，如PCNA、AE1、EMA、CD20等；
B.V型，高pH值和低pH值染色較好，而pH值4-5染色結(jié)果較差，如ER、Ki-67等；
C.上升型，隨著pH值的增加，染色結(jié)果逐漸增強，如HMB45等；
D.下降型，隨著pH值的增加染色結(jié)果逐漸減弱，當然這種類型的抗體只是個別的現(xiàn)象，如MOC31。
一個有趣的現(xiàn)象值得注意，即在高pH值都有較好的染色結(jié)果，所以目前比較推崇的抗原修復液為高pH值得修復液，如1mMEDTA, pH8.0或pH9.0等。但是由于傳統(tǒng)習慣，絕大多數(shù)醫(yī)院和實驗室都在使用pH6.0的枸櫞酸緩沖液。綜合以上各種抗體的染色狀況，考慮到臨床工作的實際情況，許多國外免疫組化專家建議，在常規(guī)的免疫組化工作中，全部選用高pH值得修復液來代替目前廣為使用的pH6.0枸櫞酸緩沖液。為此，本公司已經(jīng)推出pH8.0和pH9.0的新型抗原修復液。經(jīng)驗證，絕大多數(shù)的抗體使用pH9.0得修復液效果都要優(yōu)于pH6.0的枸櫞酸，尤其是核陽性的抗體。所以，在常規(guī)的免疫組化工作中，使用高pH值的抗原修復液是今后的必然趨勢。
目前抗原熱修復所采用的方法主要有微波爐修復和高壓鍋修復兩種，從“表2”中可以看出，由于高壓鍋修復具有溫度均一、節(jié)省時間、效果穩(wěn)定等特點，已經(jīng)越來越受到人們的青睞。
掃碼咨詢微信客服
掃碼咨詢微信客服
©Copyright 上海雅吉生物科技有限公司 All Rights Reserved. ICP備案號：滬ICP備18032507號-1 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng)
