每天對待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了 ，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些慘痛經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?
早走早脫身，從此專注雅吉生物
1. 嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。
2. 不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。
3. 有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測。
4. 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換 (滅菌水加進(jìn)去)。
5. 晚上離開的時(shí)候最好給細(xì)胞房照紫外，超凈臺是用完就開。
6. 最好的是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用細(xì)胞房在養(yǎng)細(xì)胞。
非科班出身經(jīng)驗(yàn)分享
1. 別怕浪費(fèi)。槍頭什么的只要有可能污染就換，如果用酒精燈就什么都稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。
2. 動(dòng)作要既輕柔又有力。動(dòng)作太重會(huì)有一堆一堆的氣泡，動(dòng)作太輕就吹不下來... 剛開始的時(shí)候吹細(xì)胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來就是吹的時(shí)候槍里的培養(yǎng)基不要一次全都壓出來，留一點(diǎn)，槍的最頭部盡量深的在液面以下。
3. 離開過操作臺的東西再進(jìn)操作臺之前一定要用酒精噴一遍，包括一切實(shí)驗(yàn)耗材、儀器、以及你帶著手套的手。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對實(shí)驗(yàn)臺的消毒。紫外什么的，用前用后都照個(gè) 30 分鐘。
5. 身體的各個(gè)部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實(shí)驗(yàn)臺，又比如培養(yǎng)箱內(nèi)部。
6. 細(xì)胞的密度根據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)、傳代的時(shí)間以及自己的心情來定。培養(yǎng)基的話最多最多不要超過 2 天就要換一次。細(xì)胞可以不傳代，但是培養(yǎng)基是一定要換的。
大概就是，不該碰的地方不碰，有影響的地方少碰; 該使勁的時(shí)候絕對不含糊，不該使勁的地方一定忍住。如果是比較簡陋的操作臺就一定要擺個(gè)酒精燈，所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進(jìn)行。如果是高級臺子就多用酒精噴噴。感覺生物的實(shí)驗(yàn)，心疼錢就還是不要做了。
最后一點(diǎn)點(diǎn)絕對非科班的經(jīng)驗(yàn)。癌細(xì)胞真是堅(jiān)挺。有一次實(shí)在是不想傳了，放了 5 天吧，感覺都長了幾層出來，培養(yǎng)基都黃了。抱著試一試的心情傳了一次，又堅(jiān)強(qiáng)的活過來了。當(dāng)然，狀態(tài)肯定也差的很了。
換種心情，好好生活!
養(yǎng)了三年細(xì)胞，各種腫瘤細(xì)胞，說一點(diǎn)自己的看法：
1. 培養(yǎng)細(xì)胞前，可以看看細(xì)胞特點(diǎn)說明書，包括細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
2. 不同細(xì)胞生長周期不同，有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時(shí)候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了，有的又是特別慢，等的人心焦，BT474 就是，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時(shí)候兩周多才能長滿，所以就要在培養(yǎng)細(xì)胞的過程中多多摸索了。
3. 對于嬌弱的細(xì)胞，就得細(xì)心呵護(hù)了，胰酶消化不能過久，吹得時(shí)候要輕柔，離心時(shí)候也要注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間，每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。
4. 凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天最好更換一次培養(yǎng)基。
5. 培養(yǎng)箱隔一段時(shí)間徹底用酒精棉擦洗一次。
6. 養(yǎng)細(xì)胞最大的教訓(xùn)：不能偷懶!
細(xì)胞虐我千百遍，我待細(xì)胞如初戀。
1. 不管買的細(xì)胞、惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染; 迅速擴(kuò)增凍存。
2. 發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細(xì)胞時(shí); 細(xì)菌污染，真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細(xì)胞會(huì)長的慢，買個(gè)支原體檢測的 kit 定期檢測一下。
3. 細(xì)胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。
4. 細(xì)胞的傳代一定要規(guī)律，保持相同的 confluency 和傳代時(shí)間間隔，不要隨心所欲或者拖延。
5. 注意個(gè)人衛(wèi)生。
靠內(nèi)心感動(dòng)細(xì)胞
1. 自己的細(xì)胞自己養(yǎng)，血的教訓(xùn)。
2. 在生物安全柜 (或者超凈臺)，槍頭，血清管，血清，培養(yǎng)基，瓶子都足夠好，并且細(xì)胞房有良好的衛(wèi)生措施 (比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA 等等) 且不違法操作原則的情況下，你其實(shí)很難污染。
3. 上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺子里照啊 (不過這個(gè)其實(shí)也不大好，因?yàn)闀?huì)擋住紫外線)，使用前 SDS+酒精擦臺子，進(jìn)出超凈臺一定要酒精擦手。
4. 少對細(xì)胞說話，多靠內(nèi)心來感動(dòng)它們 (是的! 心不誠是不可以的!) 至少 1 天看 1 次。
養(yǎng)細(xì)胞很容易
養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：
1. 所有的東西使用最好的，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞。
2. 動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因。
3. 有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措。
4. 要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，細(xì)胞房的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)。
5. 個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
6. 細(xì)胞房不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。
細(xì)胞養(yǎng)不好，自掛東南枝
現(xiàn)在一大型藥企養(yǎng)細(xì)胞做檢測，工作量很大，很多地方都沒辦法非常仔細(xì)的做。但是兩年下來只出現(xiàn)過一次污染，總結(jié)一下心得：
1. 好的潔凈室，空調(diào)系統(tǒng)跟得上。
2. 好的生物安全柜，硬件跟的上。
3. 瓶子移液器吸頭大都是進(jìn)口，耗材跟的上。除了這些就是自己的操作習(xí)慣了。
4. 任何東西不要從敞開的瓶口上面經(jīng)過。
5. 雖然酒精燈會(huì)干擾安全柜氣流但是還是需要一盞用來勤燒瓶口。
6. 實(shí)驗(yàn)時(shí)所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。
養(yǎng)細(xì)胞就像打仗
細(xì)胞飼養(yǎng)涵蓋的內(nèi)容太廣了，而且不同種類細(xì)胞的飼養(yǎng)難度以及技術(shù)要求不同，腫瘤細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，上皮細(xì)胞... 甚至各類干細(xì)胞... 每一種都有自己的生長要求。如果只是單純的一般性操作，大同小異，個(gè)人覺得練好技術(shù)的情況下注意幾點(diǎn)就好:
1. 各種無菌，從培養(yǎng)基到操作過程再到培養(yǎng)箱，時(shí)刻注意無菌。本人曾經(jīng)所在的實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過大規(guī)模污染并最終導(dǎo)致所有細(xì)胞集體毀滅... 教訓(xùn)慘痛。
2. 培養(yǎng)基的配制一定要做好梯度摸索并詳細(xì)記錄，否則細(xì)胞死都不知道怎么死的。
3. 盡量提高操作熟練度，減少培養(yǎng)皿在培養(yǎng)箱外的滯留時(shí)間，細(xì)胞很脆弱，經(jīng)不起折騰，不像人，熱了有空調(diào)，冷了能烤火。
4. 把握好培養(yǎng)基更換的時(shí)間，不同細(xì)胞類型時(shí)間不同，早了浪費(fèi)試劑，晚了可能全軍覆沒。
5. 經(jīng)驗(yàn)很重要，養(yǎng)細(xì)胞的很多經(jīng)驗(yàn)?zāi)闶菬o法在公開的書籍和資料上找到的。多向?qū)嶒?yàn)室前輩學(xué)習(xí)，他們會(huì)讓你少走很多彎路，真的。
養(yǎng)細(xì)胞就像打仗，知彼知己，百戰(zhàn)不殆。只有了解你養(yǎng)的對象，才能把他養(yǎng)好。
細(xì)胞就是矯情
養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞這個(gè)東西呢有的時(shí)候真說不清。養(yǎng)過一段時(shí)間的巨噬細(xì)胞，一開始操作各種謹(jǐn)慎小心，隨時(shí)默念各種無菌原則，培養(yǎng)基什么的都用的進(jìn)口的，其實(shí)國產(chǎn)貨真的不差，有錢就是任性! 但細(xì)胞還是萎靡不振，兩個(gè)多星期過后實(shí)在懶得管，換液等操作也很隨意的草草進(jìn)行，酒精也懶得噴，結(jié)果這貨卻開始瘋長，過了幾天居然達(dá)到一天要傳一次代，而且數(shù)量甚至可以一傳三， 所以說，有的細(xì)胞就是矯情。
