鈣檢測(cè)試劑盒(鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

鈣(Calcium)是一種金屬元素，常溫下呈銀白色晶體，動(dòng)物的骨骼、蛤殼、蛋殼都含有碳酸鈣,檢測(cè)生命體鈣含量，主要通過(guò)檢測(cè)鈣離子濃度實(shí)現(xiàn)的,用分光度法檢測(cè)鈣較為常見(jiàn)該法需要合適的金屬指示劑或選擇性結(jié)合鈣離子后引起變色的染料化合物目前較為常用的染料有鄰-甲酚酞絡(luò)合酮(OCPC)、偶氮砷Ⅲ、甲基麝香草酚藍(lán)(MTB)等。

雅吉生物鈣檢測(cè)試劑盒(鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法)是利用溶液中鈣離子在堿性條件下能與OCPC結(jié)合，生成紫紅色的絡(luò)合物，加入鎂離子螯合劑，去除鎂離子背景干擾，通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)575nm處吸光度，根據(jù)公式計(jì)算出總鈣含量。

該法的優(yōu)點(diǎn)：

1、是國(guó)際上推薦的血清鈣的常規(guī)檢測(cè)方法;

2、試劑單一，操作簡(jiǎn)便;

3、靈敏度高;

4、顯色穩(wěn)定;

5、使用樣本量小。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、離心管或試管

2、比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

1、制備樣品︰

①血漿、血清樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20°℃凍存，用于Ca的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品︰取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于Ca的檢測(cè)。

③高濃度樣品︰如果樣品中含有較高濃度的Ca，可以使用ddHzO稀釋，不宜使用普通蒸餾水稀釋。

2、配制Ca顯色工作液︰臨用前，取Ca Assay Buffer和OCPC顯色液等量混合，即為Ca顯色工作液，即配即用;4℃避光保存，不宜久置。

3、Ca加樣︰選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無(wú)菌聚乙烯離心管，

按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的鈣離子含量過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

4、Ca測(cè)定:混勻，室溫靜置10min ,以空白管調(diào)零，比色杯光徑1cm ,分光光度計(jì)575nm處檢測(cè)，讀取標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管的吸光度(即為A_{標(biāo)準(zhǔn)}，A_測(cè)定)。

計(jì)算:

血清、血漿中鈣(mmol/L)=(A_測(cè)定/A_{標(biāo)準(zhǔn)})×2.5

組織中鈣(mmol/mg)=(A_測(cè)定/A_{標(biāo)準(zhǔn)})×2.5×V/待測(cè)樣品質(zhì)量(mg)

式中:

A_測(cè)定=測(cè)定管的吸光度

A_{標(biāo)準(zhǔn)}=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度

V=組織提取液的總體積(L)

參考區(qū)間∶

健康成年人血清鈣濃度︰2.1~2.6mmol/L

兒童血清鈣濃度:2.25~2.67mmol/L

性能指標(biāo)：

線性范圍:1.25~5.0mmol/L

回收率:98%~101.5%

批內(nèi)CV: 1.08%~1.60%

批間CV∶3.05%~4.12%

注意事項(xiàng)∶

1、溶血樣本對(duì)檢測(cè)有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

2、OCPC顯色液偶爾會(huì)結(jié)晶析出，配制成的顯色工作液有時(shí)會(huì)析出，可取上清液使用。

3、該試劑盒對(duì)鈣離子敏感度較高，測(cè)定器皿一定要干凈，最好使用一次性聚乙烯塑料器皿。

4、可用血清或肝素抗凝血漿樣本，不宜采用鈣螯合劑及草酸鹽做抗凝劑的樣本。5、膽紅素可產(chǎn)生負(fù)干擾，含有較高膽紅素的樣本可用血清對(duì)照消除該干擾。

6、本法能夠用于自動(dòng)生化分析儀終點(diǎn)檢測(cè)法。

7、在該試劑盒條件下建議待測(cè)樣品中鈣離子濃度應(yīng)大于0.5mmolL為宜，否則有可能造成檢測(cè)誤差。

8、如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

有效期∶6個(gè)月有效﹔常溫運(yùn)輸，4℃保存。

附錄:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:雅吉生物在室溫條件下按說(shuō)明書(shū)操作，對(duì)5mM鈣標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系列稀釋并通過(guò)酶標(biāo)儀570nm測(cè)定相應(yīng)的吸光度值，其標(biāo)準(zhǔn)曲線參考如下根據(jù)檢測(cè)結(jié)果我們建議0.1~3mM的樣品可以直接檢測(cè)，3mM以上的樣品根據(jù)初檢結(jié)果做適當(dāng)稀釋再次檢測(cè)。