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Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么選擇？

發(fā)布時間：2024/3/11 11:00:33      閱讀次數(shù)：295

  Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線怎么選擇？Elisa實驗選擇什么方程去擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線最合適呢？

    在s曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測時尺度點(可以是倍比稀釋的，也可以不是)濃度假如和相應(yīng)的吸光度(od)值假如能夠呈現(xiàn)直線關(guān)系當(dāng)然是最理想的了，這時可以通過excel等利便的獲得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。
    關(guān)于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于Elisa及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內(nèi)，logistic應(yīng)該都能擬合得較為理想。假如用來定量，s形曲線的中間段(較陡處)是比較好的，而兩真?zhèn)�平坦部門計算誤差會大，有時甚至?xí)艽蟆Ｓ糜诿庖邫z測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前國際上最流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較準(zhǔn)確的獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)od值往往是"s"型的曲線關(guān)系，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進(jìn)行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了s形的哪一部門，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。當(dāng)然，假如用于定量，仍是在中間一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。但并不是說它就是萬能的。事實上不僅是Elisa，其它良多生物學(xué)反應(yīng)都是s形曲線，也都可以用logistic曲線擬合，主要原因在于不同濃度結(jié)合率不是等比的。所以對于S曲線擬合度要求必須達(dá)到0.995以上，但對于直線，二次函數(shù)，指數(shù)要求大于0.95以上，對于雙對數(shù)擬合直線必須達(dá)到0.99以上，對于間接競爭法，濃度和吸光度呈現(xiàn)反比，相關(guān)系數(shù)必須達(dá)到0.92以上。

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