【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)： HPV 假病毒

【包裝規(guī)格】

15μl /30μl /50μl /100μl/管

【預(yù)期用途】

用于體外檢測(cè)血清、單抗等樣品的 HPV 中和抗體滴度。

【檢驗(yàn)原理】

中和抗體能在體外與 HPV 假病毒中和，使得部分假病毒喪失感染細(xì)胞的能力，進(jìn)入細(xì)胞的假 病毒會(huì)表達(dá) eGFP、RFP 和 E2-Crimson 等熒光報(bào)告基因蛋白。通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀讀取并計(jì)算 每孔的熒光斑點(diǎn)數(shù)， 將待測(cè)樣品孔的熒光斑點(diǎn)數(shù)與假病毒對(duì)照組的熒光斑點(diǎn)數(shù)進(jìn)行比較， 可計(jì)算待

測(cè)樣品孔的抑制病毒百分比。

通過(guò)計(jì)算公式可以計(jì)算出當(dāng) 50%假病毒被抑制時(shí)待測(cè)樣品的稀釋倍數(shù)，即 ID50（Inhibition dilution），用 ID50 來(lái)表示待測(cè)樣品對(duì)假病毒的中和活性。 ID50 值越大，抗體中和活性越高。若樣品

有具體濃度，可計(jì)算 50%假病毒被抑制時(shí)待測(cè)樣品的濃度，即 EC50 ，EC50=樣品濃度/ ID50。

【主要組成成分】

HPV 假病毒顆粒， L1 、L2 蛋白，報(bào)告基因

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-80℃ 密封貯存。有效期： 12 個(gè)月。

避免反復(fù)凍融。

生產(chǎn)日期及有效期詳見(jiàn)標(biāo)簽。

【操作要求】

該產(chǎn)品為 HPV 假病毒，中和實(shí)驗(yàn)操作需在生物安全柜中進(jìn)行。

【檢測(cè)儀器要求】

若進(jìn)行中和抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)， 需采用可進(jìn)行熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)的儀器， 如 Cellular Technology Limited

（CTL）-酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀等。

熒光顯微鏡： 僅能觀察到綠色熒光蛋白 eGFP 及紅色熒光蛋白 RFP，且不可計(jì)數(shù)， 不推薦使用。

【必需實(shí)驗(yàn)材料要求】

細(xì)胞： HEK  293FT 細(xì)胞，無(wú)其他推薦的替代細(xì)胞。若采用其他細(xì)胞，客戶(hù)需自行進(jìn)行方法學(xué)

的建立及驗(yàn)證。

 HPV假病毒中和抗體實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)

【使用方法】

1.    提前預(yù)鋪細(xì)胞： 提前 2-6 小時(shí)將 HEK 293FT 細(xì)胞消化， 以一定數(shù)量（建議細(xì)胞數(shù)： 1.5×104/孔）

加入 96 孔透明平底無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)板中。

2.    待測(cè)樣品系列稀釋?zhuān)涸?/font> 96 孔無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)板中，將待測(cè)樣品進(jìn)行系列稀釋。 具體板子布局參

見(jiàn)圖 1。

3.    病毒稀釋?zhuān)?/font> 本產(chǎn)品為假病毒母液， 客戶(hù)依據(jù)報(bào)告中假病毒的滴度進(jìn)行稀釋使用（1TCID50=1 熒

光斑點(diǎn)）。

4.    待測(cè)樣品與病毒混合孵育： 將系列稀釋后的待測(cè)樣品與稀釋后的假病毒溶液混合（推薦體積比

1:1），4℃~8℃條件下孵育 1 小時(shí)。

5.    孵育結(jié)束后，將上述混合液與提前預(yù)鋪的細(xì)胞進(jìn)行混合。

6.    將細(xì)胞培養(yǎng)板置于 37℃、5% CO2  的細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 60 ~96 小時(shí)。

7.    使用 ELISPOT 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算感染抑制率（%）。

感染抑制率（%）=1-（樣本檢測(cè)值-細(xì)胞對(duì)照值） /（病毒對(duì)照值-細(xì)胞對(duì)照值） ×100%。

8.    客戶(hù)根據(jù)自定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行 ID50 計(jì)算（推薦使用 Reed-Muench 法）。HPV假病毒中和抗體實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)

 【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)】

1.    中和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須設(shè)置細(xì)胞對(duì)照和病毒對(duì)照（見(jiàn)圖 1）。

2.    中和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要設(shè)置陰性?xún)?nèi)控品及陽(yáng)性?xún)?nèi)控品（客戶(hù)自備）來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)是否成立。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

外觀應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：包裝完整，無(wú)破損，文字符號(hào)標(biāo)識(shí)清晰。

【產(chǎn)品使用注意事項(xiàng)】