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郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

發(fā)布時間:2024/7/27 15:32:47      閱讀次數:86

 郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒


郁 金 香 碎 色 病 毒
探 針 法 熒 光 定 量  RT- PCR 試 劑 盒
Tu lip  b reaki ng  Pot y vi rus   P ro be  RT - q P C R  K it產品及特點
本試劑盒可用于檢測郁金香碎色病毒。郁金香碎色病毒(Tulip breaking Potyvirus , TBV)屬馬鈴薯 Y 病毒科馬鈴薯 Y 病毒屬,只侵染郁金香屬(Tulipa spp.)和百合屬(Lilium spp.)植物,導致郁金香和百合的花瓣和葉片出現斑駁的雜色條紋,感染 TBV 的郁金香不 僅表現出花色雜色,而且植株也會退化。本產品是根據探針法熒光定量 RT-PCR 原理開發(fā) 的郁金香碎色病毒檢測試劑盒,它具有下列特點:
1.   即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2.   引物等組分經過優(yōu)化,靈敏度高。
3.   提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.   特異性高,引物是根據郁金香碎色病毒 RNA 序列高度保守區(qū)設計,不會跟其他 病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應。
5.   既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5 個 數量級。
6.   本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
7.   本產品只能用于科研。
 
成分規(guī)格

產品組成 編號 規(guī)格
2 × OneStep Probe Mix 021101a 550 μl
OneStep Probe Enzyme Mix 021102b 55 μl
DEPC-H2O 070401 1 ml
熒光模板稀釋液 070407 1 ml
郁金香碎色病毒
RT-qPCR 引物-探針混合液
 
1525190yp
 
210 μl
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照
(1×10E8  拷貝/μL)
 
1525190pc
 
50 μl
 
 保存條件
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試 劑。
 郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
使用方法
一、RNA 提取(樣本制備區(qū))
用自選方法提取純化樣品 RNA,本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。建 議使用病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒(Cat:GZ010702-50)提取 RNA。
二、稀釋標準曲線樣品(樣本制備區(qū))
(由于陽性對照濃度高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分)。
1.    標記 6 個離心管,分別為 7 ,6 ,5 ,4 ,3 ,2。
2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液,(最好用帶芯槍頭,下同)。
3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL  的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘, 得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.    換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.    重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標準曲線,將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。
三、試劑配制(試劑準備區(qū))
若有 N 個待檢樣品,準備 N+2 個 qPCR 管(N 個待檢樣品+1個陰性對照+6 個陽性對 照) ,向各 qPCR 管中分別加入下列成分。
成分 樣品管 N+2  qPCR    陰性對照 qPCR    陽性對照
2 × OneStep Probe Mix 各 10 μL 10 μL 10 μL
OneStep Probe Enzyme Mix 各 1 μL 1 μL 1 μL
郁金香碎色病毒 RT-qPCR  引物-探針 混合液 各 4 μL 4 μL 4 μL
  

郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
轉移至樣本準備區(qū)。
四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 μl 模板,順序為陰性對照(DEPC-H2O)、待測樣品模板、 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照,離心 30 秒,立即進行擴增反應。
五、擴增反應(擴增及產物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴增儀器樣品槽相應位置,進行擴增,擴增程序如下:

過程 溫度 時間
逆轉錄 50℃ 20 min
預變性 95℃ 3 min
qPCR 反應  (45 個循環(huán)) 95℃ 15 sec
60℃ 20 sec
信號通道 FAM 通道采集熒光信號

六、結果分析
1.  如果制作標準曲線,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制 標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,推算出 其濃度。
2.  如果未制作標準曲線,按照如下標準判定結果:
陽性對照(1×10E5 拷貝/μL)結果:Ct 值<30 ,有明顯指數增長,呈典型的 S 型曲 線。
陰性對照結果:Ct 值>40 或無 Ct 值,無明顯指數增長期和平臺期。
樣本檢測結果:Ct 值<38 ,有明顯指數增長,表明樣本中檢測出該病毒,結果為陽  性;Ct 值>40 或無 Ct 值,表明樣本中未檢測出該病毒,結果為陰性;Ct 值在38-40 范  圍,應對樣本進行復檢,如重復實驗結果 Ct 值仍在 38-40 范圍,有明顯指數增長,則判 定為陽性,否則為陰性。
 
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產品編號 產品名稱
010702-50 病毒基因組 DNA/RNA 提取試劑盒(離心柱型)
020701-1 2 ×Probe qPCR Mix
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