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發(fā)布時間:2024/7/27 15:32:47 閱讀次數:86
郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
產品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
2 × OneStep Probe Mix | 021101a | 550 μl |
OneStep Probe Enzyme Mix | 021102b | 55 μl |
DEPC-H2O | 070401 | 1 ml |
熒光模板稀釋液 | 070407 | 1 ml |
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探針混合液 | 1525190yp | 210 μl |
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 1525190pc | 50 μl |
成分 | 樣品管 N+2 個 | qPCR 陰性對照 | qPCR 陽性對照 |
2 × OneStep Probe Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
OneStep Probe Enzyme Mix | 各 1 μL | 1 μL | 1 μL |
郁金香碎色病毒 RT-qPCR 引物-探針 混合液 | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
郁金香碎色病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
轉移至樣本準備區(qū)。
四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 μl 模板,順序為陰性對照(DEPC-H2O)、待測樣品模板、 郁金香碎色病毒 RT-qPCR 陽性對照,離心 30 秒,立即進行擴增反應。
五、擴增反應(擴增及產物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴增儀器樣品槽相應位置,進行擴增,擴增程序如下:
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉錄 | 50℃ | 20 min |
預變性 | 95℃ | 3 min |
qPCR 反應 (45 個循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 20 sec | |
信號通道 | FAM 通道采集熒光信號 |
六、結果分析
1. 如果制作標準曲線,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制 標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,推算出 其濃度。
2. 如果未制作標準曲線,按照如下標準判定結果:
陽性對照(1×10E5 拷貝/μL)結果:Ct 值<30 ,有明顯指數增長,呈典型的 S 型曲 線。
陰性對照結果:Ct 值>40 或無 Ct 值,無明顯指數增長期和平臺期。
樣本檢測結果:Ct 值<38 ,有明顯指數增長,表明樣本中檢測出該病毒,結果為陽 性;Ct 值>40 或無 Ct 值,表明樣本中未檢測出該病毒,結果為陰性;Ct 值在38-40 范 圍,應對樣本進行復檢,如重復實驗結果 Ct 值仍在 38-40 范圍,有明顯指數增長,則判 定為陽性,否則為陰性。
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