ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及原因分析
（一） ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果顏色淺、靈敏度偏低的原因
1. 試劑盒在運(yùn)輸、保存期間放置的溫度過高，時(shí)間過長(zhǎng)，造成抗原、抗體效價(jià)下降，酶的活力降低。
2. 試劑盒已經(jīng)超出保存的有效期，抗原抗體效價(jià)下降，酶的活性降低。
3. 移液取樣不足，移液時(shí)抽吸、排放太快，移液嘴內(nèi)壁掛液太多或者內(nèi)壁不清潔。造成加樣量不足。
4. 孵育溫度偏低，或多塊反應(yīng)板重疊放置造成孔內(nèi)的實(shí)際溫度偏低，使抗原、抗體復(fù)合物形成過少。
5. 保溫時(shí)間不足，抗原、抗體反應(yīng)不完全。
6. 顯色劑加入量不足。
7. 顯色液A,B比例不對(duì)。
8. 洗滌時(shí)沖擊力過大，洗滌液浸泡時(shí)間太長(zhǎng)，洗滌次數(shù)增加，導(dǎo)致已經(jīng)形成的抗原、抗體復(fù)合物洗脫。
9. 底物反應(yīng)的溫度不夠、時(shí)間不足。
（二） ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽性對(duì)照不顯示的原因
1. 洗滌液配制有誤。
2. 終止液誤作為濃縮洗滌液或者酶結(jié)合物稀釋使用。
3. 漏加酶結(jié)合物，誤加酶結(jié)合物或者酶標(biāo)二抗的實(shí)驗(yàn)順序錯(cuò)誤。
4. 終止液當(dāng)作緩沖溶液使用。
5. 配制溶液中殘留了滅活酶活力的物質(zhì)。
6. 底物液未加入OPD或者TMB.
7. 運(yùn)輸、存儲(chǔ)不當(dāng)、導(dǎo)致酶活力喪失。
8. 底物液中未加入過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。
（三） ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果全部顯色的原因
1. 酶結(jié)合物的濃度過大。
2. 孵育溫度偏高，底物顯色時(shí)間過長(zhǎng)。
3. 洗滌不充分，樣品有其他成分殘留或者酶結(jié)合物殘留。
4. 底物配制時(shí)間過久，底物受光照射時(shí)間較長(zhǎng)或污染。
5. 整批樣品放置時(shí)間過長(zhǎng)被污染或生長(zhǎng)細(xì)菌。
6. 移液嘴重復(fù)使用時(shí)，未清洗干凈或者消毒不徹底。
7. 配制溶液的水質(zhì)有問題。
（四） ELSIA實(shí)驗(yàn)中結(jié)果陰性、陽性對(duì)照顯色差距較小的原因
1. 稀釋不準(zhǔn)、加樣量不準(zhǔn)。
2. 加樣時(shí)各孔均被污染。
3. 底物不新鮮，配制時(shí)間過長(zhǎng)或被污染。
4. 試劑效價(jià)下降或超過了試劑的有效使用期。
5. 配制溶液的水質(zhì)有問題。
（五） ELSIA實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性不好的原因
1. 樣品加入量多少不一，加樣時(shí)間又長(zhǎng)有短。
2. 樣品加入后未充分混合均勻。
3. 移液加樣器加樣量不一致。
4. 酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)。
5. 操作過程中個(gè)別反應(yīng)孔中液體外濺。
6. 不同批號(hào)試劑混用。
7. 瓶蓋交叉使用。
8. 孵育條件和保溫時(shí)間不一致。
9. 顯色時(shí)間和條件不一致
10. 邊緣效益，導(dǎo)致周邊孔（尤其是四個(gè)角）較中央孔顯色深。
11. 將酶結(jié)合物或底物溶液加在孔壁上，并有殘留。
12. 酶結(jié)合物未充分混勻就加入反應(yīng)孔中。
13. 洗滌條件不一致。
14. 多加或少加了酶標(biāo)記物、底物。ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及原因分析
