暑假到期了，新學(xué)期實(shí)驗(yàn)室重新開啟。開始實(shí)驗(yàn)的第一步就是先將凍了一個假期的細(xì)胞重新復(fù)蘇培養(yǎng)起來�，F(xiàn)在重新溫習(xí)一下細(xì)胞復(fù)蘇的流程吧。
復(fù)蘇流程
01準(zhǔn)備工作確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境整潔，所需儀器設(shè)備如凈化工作臺、離心機(jī)、恒溫水浴箱、培養(yǎng)箱等處于良好狀態(tài)。準(zhǔn)備適量的新鮮培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱。
02取出凍存管從液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出凍存管，注意佩戴防護(hù)手套和護(hù)目鏡，以防凍傷和液氮濺射。
03快速解凍將凍存管直接放入預(yù)熱至37℃的恒溫水浴鍋中，不時搖動以加速融化。注意不要讓水浴鍋的水接觸到凍存管的管口，以防污染。融化時間應(yīng)控制在2分鐘內(nèi)，以減少細(xì)胞在解凍過程中受到的損傷。
04消毒與轉(zhuǎn)移解凍后，用75%酒精擦拭凍存管外部進(jìn)行消毒，晾干后打開瓶蓋。將融化的細(xì)胞懸液用吸管或移液槍轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中。
05離心與重懸根據(jù)細(xì)胞類型和離心機(jī)的要求，選擇合適的離心速度和時間進(jìn)行離心。一般情況下，低速離心5分鐘即可。離心后，棄去上清液中的DMSO等冷凍保護(hù)劑，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
06接種與培養(yǎng)將重懸后的細(xì)胞接種至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO₂的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞類型和生長情況，適時更換新鮮培養(yǎng)基，去除死細(xì)胞和代謝廢物。
注意事項(xiàng)
01無菌操作整個復(fù)蘇過程必須嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，以防止細(xì)胞污染。
02控制時間解凍時間不宜過長，以免細(xì)胞受到損傷。同時，解凍后的細(xì)胞應(yīng)盡快接種至培養(yǎng)皿中，以減少在常溫下的暴露時間。
03調(diào)整細(xì)胞濃度如果復(fù)蘇后的細(xì)胞濃度過低，可以通過離心后調(diào)整細(xì)胞濃度來提高細(xì)胞的生長速度。
04觀察與記錄復(fù)蘇后應(yīng)定期觀察細(xì)胞的生長情況，包括形態(tài)、密度和生長速度等。同時，詳細(xì)記錄復(fù)蘇細(xì)胞的名稱、數(shù)量、復(fù)蘇時間、存放部位等信息，以便后續(xù)跟蹤和管理。
05使用合適的培養(yǎng)基根據(jù)細(xì)胞類型和復(fù)蘇后的培養(yǎng)需求選擇合適的培養(yǎng)基，以保證細(xì)胞能夠正常生長。
