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發(fā)布時間：2024/9/19 9:17:26 閱讀次數(shù)：100
J774A.1，中文名小鼠單核巨噬細胞，在貼壁細胞中屬于難消化的細胞類型，是新手小伙伴最頭痛的細胞之一。其最大的難點就是難消化，一般細胞用胰酶消化1-2分鐘就消化下來了，再長的半個小時都行了，可這細胞消化到1ml 0.25%胰酶消化液用沒了還沒消化下來。
今天小編請教了幾位技術老師為大家?guī)鞪774A.1的細胞消化教學步驟。
使用細胞刮刀刮下來
準備材料消毒過的未拆封細胞刮刀一支、超凈臺、消毒過的未拆封離心管、消毒過的未拆封移液管(5-10ML)、消毒過的移液槍
操作步驟
1超凈臺提前打開消毒30分鐘，操作人員全身消毒進行無菌規(guī)范步驟；
2從培養(yǎng)箱中取出裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶和消毒過的未拆封細胞刮刀一起放置在超凈臺上，其他物品保持未拆封放置在超凈臺順手位置（注意：培養(yǎng)瓶豎起放置且瓶蓋不要提前旋開，防止污染。）；
3拆開細胞刮刀后，將刮刀單手舉起（勿碰到桌面）；另一只手單手旋開培養(yǎng)瓶蓋，瓶蓋內面朝上放置；
4將細胞刮刀伸入瓶內，通過瓶內無細胞面調整刮刀刀頭方向，由外朝內刮動。
5使用完成后，直接丟棄細胞刮刀（無須將細胞刮刀放入瓶內培養(yǎng)基內攪動，防止細胞受到刺激），使用移液槍吸取瓶內培養(yǎng)基輕柔地吹下瓶壁，將細胞與培養(yǎng)基混合，反復2-3次；6使用移液槍將細胞與培養(yǎng)基的混合溶液移入離心管，之后使用離心機進行離心，之后步驟可參照正常傳代或凍存步驟操作。
使用胰酶長時間消化一般該步驟是技術部不建議使用的，一是長時間消化會對細胞造成傷害，二是J774A.1屬于巨噬細胞，胰酶對其的刺激會導致其分化變得越來越難消化。若實驗室設備暫無細胞刮刀且該細胞急于傳代可使用此方法進行應急操作。
準備材料細胞培養(yǎng)箱、含10%FBS的完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶消化液(新)、超凈臺、消毒過的未拆封離心管、消毒過的未拆封移液管(5-10ML)、消毒過的移液槍、消毒過的未拆封滴管(5ML)
操作步驟
1超凈臺提前打開消毒30分鐘，將0.25%胰酶消化液放置至常溫，操作人員全身消毒進行無菌規(guī)范步驟；
2從培養(yǎng)箱中取出裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶和胰酶消化液一起放置在超凈臺上，其他物品保持未拆封放置在超凈臺順手位置（注意：培養(yǎng)瓶豎起放置且瓶蓋都不要提前旋開，防止污染。）；
3拆開移液管裝在移液槍上并單手舉起（勿碰到桌面），另一只手單手旋開培養(yǎng)瓶蓋，瓶蓋內面朝上放置，將瓶內培養(yǎng)基吸走倒入廢液桶，并丟棄移液管，將移液槍放回原處；
4拆開5ML滴管并單手旋開消胰酶消化液瓶蓋，瓶蓋內面朝上放置，吸取1ML胰酶消化液后蓋上胰酶消化液瓶蓋，將胰酶消化液放入裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶內蓋上瓶蓋并丟棄滴管，將胰酶消化液放回原處；
5將裝有J774A.1的T25培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO2，95%AIR的培養(yǎng)箱靜置30min，之后取出后棄掉使用的胰酶后再次重復上一步操作；
6以此步驟消化滿1h后，使用移液槍將培養(yǎng)瓶內的胰酶移入廢液桶，換一根新的移液管后移入5ML含10%FBS的完全培養(yǎng)基終止消化，使用移液槍吸取瓶內培養(yǎng)基輕柔地吹下瓶壁，將細胞與培養(yǎng)基混合，反復2-3次。使用移液槍將細胞與培養(yǎng)基的混合溶液移入離心管，之后使用離心機進行離心，之后步驟可參照正常傳代或凍存步驟操作。
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