α1-酸性糖蛋白（AGP）是一種血液中的52千道爾頓的絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin），它保護(hù)組織免受炎癥細(xì)胞的酶，特別是彈性蛋白酶的傷害。在某些急性期炎癥反應(yīng)中，AGP的水平會(huì)升高，以限制活化的中性粒細(xì)胞顆粒體及其彈性蛋白酶造成的損害。AGP的疾病包括AGP缺乏癥，這是一種遺傳性疾病，可能導(dǎo)致炎癥期間嚴(yán)重的組織破壞。在嚴(yán)重的情況下，這可能導(dǎo)致肺氣腫和肝硬化。AGP的遺傳變異確實(shí)會(huì)發(fā)生。

α1-酸性糖蛋白（AGP）檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），用于測(cè)量雞生物液體中的AGP。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷(xiāo)產(chǎn)品 α1-酸性糖蛋白(雞)ELISA試劑盒，96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

α1-酸性糖蛋白(雞)ELISA試劑盒，96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的原理在圖1中表示。在這種測(cè)定中，樣品中的α1-酸性糖蛋白（AGP）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗AGP抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗AGP抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的AGP形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定免疫吸附劑上結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中AGP的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中AGP濃度的量度。測(cè)試樣品中AGP的量可以從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中插值得到，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

試劑（足夠96次測(cè)定的數(shù)量）

1. 稀釋液濃縮液（運(yùn)行緩沖液）

一瓶含有50毫升5倍濃縮稀釋液的運(yùn)行緩沖液。

2. 洗滌液濃縮液

一瓶含有50毫升20倍濃縮的洗滌液。

3. 酶-抗體結(jié)合物100倍

一瓶含有150微升親和純化的抗雞α1-酸性糖蛋白（AGP）抗體，與辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合，并在穩(wěn)定緩沖液中。

4. 顯色底物溶液

一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過(guò)氧化氫，在檸檬酸緩沖液中，pH值為3.3。

5. 終止液

一瓶含有12毫升0.3M硫酸。

警告：避免與皮膚接觸。

6. 抗雞AGP ELISA微孔板

十二個(gè)可移動(dòng)的八（8）孔微孔條，在孔架中。每個(gè)孔都涂有親和純化的抗雞AGP。

7. 雞AGP校準(zhǔn)品

一瓶含有凍干的雞AGP校準(zhǔn)品。

試劑準(zhǔn)備

1. 稀釋液濃縮液

提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1:5。

2. 洗滌液濃縮液

提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1:20。當(dāng)儲(chǔ)存溫度較低時(shí)，濃縮液中出現(xiàn)晶體并不罕見(jiàn)。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

3. 酶-抗體結(jié)合物

通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條添加10微升酶-抗體結(jié)合物至990微升1倍稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

4. 顯色底物溶液

按供應(yīng)狀態(tài)直接使用。

5. 終止液

按供應(yīng)狀態(tài)直接使用。

6. 抗雞AGP ELISA微孔板

按供應(yīng)狀態(tài)直接使用。揭開(kāi)微孔板袋封口，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有條和孔，放回袋中并重新密封。

7. 雞AGP校準(zhǔn)品

雞AGP校準(zhǔn)品應(yīng)分裝并冷凍保存。校準(zhǔn)品現(xiàn)在的濃度為5.19微克/毫升。雞AGP標(biāo)準(zhǔn)品需要在立即使用前準(zhǔn)備（見(jiàn)下表）。每步之間充分混合。避免起泡。

最終反應(yīng)混合物的穩(wěn)定性：

在加入終止液后，最終反應(yīng)混合物的吸光度可在長(zhǎng)達(dá)2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)量。然而，良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范要求盡快進(jìn)行測(cè)量。

結(jié)果：

1. 從每個(gè)樣品的測(cè)試值中減去平均背景值。

2. 使用標(biāo)準(zhǔn)觀(guān)察到的結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。適當(dāng)?shù)那�線(xiàn)擬合是四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線(xiàn)擬合。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中插值得到測(cè)試樣品值。校正血清稀釋因子，以得到原始樣品中AGP的濃度。

程序的局限性：

1. 當(dāng)完全理解了說(shuō)明書(shū)中的信息，并遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范時(shí)，將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果。

2. 可能影響測(cè)定性能的因素包括儀器的正確功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量、試劑和樣品移液的準(zhǔn)確性、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度。

3. 不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合或替換。

ALPCO產(chǎn)品種類(lèi)多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。