α2-巨球蛋白ELISA是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）用于測(cè)定大鼠血清和血漿中的α2-巨球蛋白。用于研究?jī)H限使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品大鼠α2-巨球蛋白ELISA試劑盒，96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

大鼠α2-巨球蛋白ELISA試劑盒，96孔檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的原理在圖1中表示。在這種測(cè)定中，樣品中的α2-巨球蛋白（A2M）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗A2M抗體發(fā)生反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗A2M抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的A2M形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中A2M的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中α2-巨球蛋白濃度的量度。測(cè)試樣品中A2M的量可以從標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

程序的局限性：

當(dāng)完全理解了說(shuō)明書中的信息，并遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范時(shí)，將獲得可靠和可重復(fù)的結(jié)果�？赡苡绊憸y(cè)定性能的因素包括儀器功能、玻璃器皿的清潔度、蒸餾水或去離子水的質(zhì)量、試劑和樣品移液的準(zhǔn)確性、洗滌技術(shù)、孵育時(shí)間或溫度。不要將試劑與其他批次或來(lái)源的試劑混合或替換。

樣品收集和處理：

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。如果血液樣品出現(xiàn)凝塊、嚴(yán)重溶血、脂血，或樣品的完整性受到關(guān)注，請(qǐng)做記錄，并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。下面列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件是一般性指導(dǎo)。尚未評(píng)估樣品的穩(wěn)定性。

? 血清樣品 - 應(yīng)通過(guò)靜脈采血。血凝塊形成后通過(guò)離心分離血清。取出血清立即進(jìn)行測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 血漿樣品 - 血液應(yīng)收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

? 已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的疊氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣品稀釋：

測(cè)定要求每個(gè)樣品在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣品都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋應(yīng)基于未知樣品的預(yù)期濃度，使稀釋后的樣品落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣品水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣品進(jìn)行系列稀釋。

血漿和血清樣品 - 推薦的起始稀釋比例為1:3000。要準(zhǔn)備1:3000的樣品稀釋液，將5微升樣品轉(zhuǎn)移到495微升1倍工作稀釋液中。這得到1:100的稀釋。接下來(lái)，將1:100的樣品通過(guò)將10微升轉(zhuǎn)移到290微升1倍工作稀釋液中進(jìn)行稀釋。這得到樣品的1:3000稀釋。每個(gè)階段都要徹底混合。

結(jié)果計(jì)算

1. 從每個(gè)孔的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

2. 對(duì)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均重復(fù)讀數(shù)進(jìn)行平均，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合將不夠精確。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到測(cè)試樣品值。校正血清稀釋因子，以得到原始樣品中α2-巨球蛋白的濃度。

附錄A 參考血清信息

本試劑盒中包含一瓶參考血清。

請(qǐng)參閱隨附的產(chǎn)品概況表以獲取特定批次的信息。

請(qǐng)注意以下事項(xiàng)：

1. 收到參考血清后應(yīng)立即冷凍。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，它在有效期前都是穩(wěn)定的。

2. 參考血清應(yīng)適當(dāng)稀釋，以適應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。有關(guān)說(shuō)明，請(qǐng)參考協(xié)議中的“樣品稀釋”部分。

3. 在移液樣品（程序部分）的同時(shí)，也應(yīng)以雙份移液參考血清。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。