親愛的科研工作者，感謝您信任雅吉生物，我們致力于為大家分享質(zhì)優(yōu)價(jià)適的質(zhì)粒，受 各種因素影響，我們只保證質(zhì)粒的關(guān)鍵序列測序正確，不能保證實(shí)驗(yàn)效果。請您收到質(zhì)粒后
請務(wù)必先轉(zhuǎn)化，再挑取單菌落擴(kuò)增，不要直接使用。如果您需要即用的大包裝質(zhì)�；虿《绢w
粒，可委托我們制備，性價(jià)比更高。
一、擴(kuò)增流程
收到產(chǎn)品后，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒菌株的
抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（常溫運(yùn)輸，存于-20 度，90 天保質(zhì)期，請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)，不要直
接使用和測序）
①收到質(zhì)粒干粉后請先 5000rpm 離心 1min，再加入 20μl ddH2O 去離子水溶解質(zhì)粒；
②取 1 支 100μl 感受態(tài)于冰上解凍 10min，加入 2μl 質(zhì)粒，再冰浴 30min 后，42℃熱激
60s，不要攪動，再冰浴 2min；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入 900μl 無抗的 LB 液體培養(yǎng)基，180rpm 震蕩 37℃培養(yǎng) 45min；
④6000rpm 離心 5min，僅留 100μl 上清液重懸細(xì)菌沉淀，并涂布至目標(biāo)質(zhì)�？剐缘� LB
平板上；（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進(jìn)行涂布，可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化
子）
⑤將平板正向培養(yǎng) 1h，再倒置 37℃培養(yǎng) 14h。如果要求是 30 度則培養(yǎng) 20h；
（菌落過多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。沒有菌落則加入 10μl 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另不要直接轉(zhuǎn)表
達(dá)感受態(tài)，要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)，重提質(zhì)粒后再導(dǎo)入表達(dá)感受態(tài)）
⑥挑取單菌落至 LB 液體培養(yǎng)基中，加入對應(yīng)抗生素，220rpm 震蕩培養(yǎng) 14h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需
要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。
2、甘油菌種（冰袋運(yùn)輸，存于-80℃，保質(zhì)期 90 天，請務(wù)必劃線挑單克隆培養(yǎng)）
四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng)，酵母菌需要先液體復(fù)蘇再四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
3、穿刺菌種（冰袋運(yùn)輸，存于 4℃，保質(zhì)期 7 天）
穿刺接種，液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
4、菌落平板（冰袋運(yùn)輸，存于 4℃，保質(zhì)期 7 天）
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中。
5、液體質(zhì)粒（冰袋運(yùn)輸，存于-20℃，保質(zhì)期 90 天）
單獨(dú)提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6、濾紙質(zhì)粒（常溫運(yùn)輸，存于-20 度，90 天保質(zhì)期，請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)，不要直
接使用和測序）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入 EP 管中，加 100ul 無菌水將濾紙浸濕并浸泡 5min，吸
取 5ul 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，離心全涂
