發(fā)布時間：2024/11/6 9:40:47 閱讀次數(shù)：151
產(chǎn)品及特點
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有食用淀粉植物源性成分�，F(xiàn)代食品加 工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官 鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于 基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品 是根據(jù)探針法熒光定量 PCR 原理開發(fā)的食用淀粉植物源性成分檢測試劑盒，它具有下列 特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物等組分經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)食用淀粉植物源性成分 DNA 序列高度保守區(qū)設(shè)計，不會 跟其他生物樣本的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5 個數(shù) 量級。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
| 2 × Probe qPCR Mix | GZ020701 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 熒光模板稀釋液 | GZ070407 | 1 mL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物-探 針混合液 |
GZ01518426yp |
260 μL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL) |
GZ01518426pc |
50 μL |
保存條件
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
使用方法
一、DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個樣品待提取，最好設(shè)置 N+2 個提取，多出的是 PC（樣品制 備陽性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）�？梢匀￡栃詫φ盏� 1000 倍稀釋液 10μL 再加 上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為 PC 。另外用水作為 NC。
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA ，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7 ，6 ，5 ，4 ，3 ，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供) ，充分震蕩 1 分鐘， 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得) ，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得) ，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。
三、試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
若有 N 個待檢樣品，準(zhǔn)備 N+2 個 qPCR 管(N 個待檢樣品+1 個陰性對照+6 個陽性對 照) ，向各 qPCR 管中分別加入下列成分。
| 成分 | N 個 待檢樣品管 | qPCR 陰性對照 | qPCR 陽性對照 |
| 2 × Probe qPCR Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 食用淀粉植物源性成分 qPCR 引物- 探針混合液 | 各 5 μL | 5 μL | 5 μL |
轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū)。
四、添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 ul 模板，順序為陰性對照（DEPC-H2O）、待測樣品模板、 食用淀粉植物源性成分 qPCR 陽性對照，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
五、擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴(kuò)增儀器樣品槽相應(yīng)位置，進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
| qPCR 反應(yīng) （45 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 20 sec | |
| 信號通道 | FAM 通道采集熒光信號 | |
六、結(jié)果分析
1. 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct值為縱軸，繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，推算出其濃 度。
2. 如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果：
陽性對照（1×10E5 拷貝/μL）結(jié)果：Ct 值<30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的 S 型曲線。 陰性對照結(jié)果：Ct 值>40 或無 Ct值，無明顯指數(shù)增長期和平臺期。
樣本檢測結(jié)果：Ct 值<38，有明顯指數(shù)增長，表明樣本中檢測出食用淀粉植物源性成 分，結(jié)果為陽性；Ct 值>40 或無 Ct值，表明樣本中未檢測出食用淀粉植物源性成分，結(jié) 果為陰性；Ct 值在 38-40 范圍，應(yīng)對樣本進(jìn)行復(fù)檢，如重復(fù)實驗結(jié)果 Ct值仍在 38-40 范 圍，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。
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