為了得到更好的實驗結(jié)果,一些ELISA試劑盒實驗新手們還需多加了解技術(shù)內(nèi)容,公司每周都會為您精心整理出重點技術(shù)要領(lǐng),能夠熟練的掌握好這些之后再應(yīng)用到實驗里面就會簡單的多.今天的主要內(nèi)容是入了ELISA的門,這些技術(shù)點你得知道.
樣本加樣方法
1 細胞上清：前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可.如果濃度太高需稀釋時,用標(biāo)準品稀釋液直接稀釋.
2 腦脊液：前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可.如果濃度太高需稀釋時,用標(biāo)準品稀釋液直接稀釋.
3 血清血漿：請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標(biāo)準品稀釋液補充至100ul.
A.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液；
B.血漿標(biāo)本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標(biāo)本收集后請分裝,凍存于－20℃,避免反復(fù)凍融.
C.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；
D.標(biāo)本應(yīng)清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除.
E.請勿使用溶血,高血脂或污染的標(biāo)本檢測,否則結(jié)果將不準確.
4 組織勻漿液的樣本,要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解,造成檢測結(jié)果的值偏低.
因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,實驗參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進行,否則就會影響實驗結(jié)果.具體是加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標(biāo)準品稀釋液補充至100ul.
因為目標(biāo)蛋白不同,可能造成降解的蛋白類型可能不一樣,如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑,有針對性加入,可節(jié)省抑制劑.如果查不到相關(guān)文獻,可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解.
