人細(xì)胞色素C（CytC）試劑盒說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用.

檢測(cè)范圍：                                                          96T

8 nmol/L -200 nmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清 血漿及相關(guān)液體樣本中細(xì)胞色素C（CytC）)含量.

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人細(xì)胞色素C（CytC）水平.用純化的人細(xì)胞色素C（CytC）抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素C（CytC）,再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素C（CytC）抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素C（CytC）呈正相關(guān).用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人細(xì)胞色素C（CytC）濃度.

試劑盒組成

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn).若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性.

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰�倍�?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋.

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同） 標(biāo)準(zhǔn)孔 待測(cè)樣品孔.在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）.加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻.

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外.

7. 溫育：操作同3.

8. 洗滌：操作同5.

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）.

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）. 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行.

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度.

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果.

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差.一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值）,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）.

5． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

6．底物請(qǐng)避光保存.

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用.

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃.

2．有效期：6個(gè)月