小鼠原B細(xì)胞株BA/F3培養(yǎng)說明書

一 細(xì)胞培養(yǎng)條件

二 細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法.收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí).鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟.（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

三 細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,培養(yǎng)過夜.第二天換液并檢查細(xì)胞密度.

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng).

1 對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法：

懸浮瓶裝細(xì)胞不開封,先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈,鏡檢細(xì)胞狀態(tài).若狀態(tài)良好,請(qǐng)將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時(shí)后拿出,瓶蓋開啟前請(qǐng)將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒 過火,將整瓶細(xì)胞懸液分別離心（1000rmp  5min）后收集于離心管中,視其離心后的細(xì)胞量進(jìn)行放回培養(yǎng)或分離培養(yǎng).（以上僅為懸浮細(xì)胞處理方法）.PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過80%,可直接進(jìn)行傳代（方法同上）.

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一 收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài).接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100×,200×各一張）,觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況.作為我方進(jìn)行售后的依據(jù).

2. 收到細(xì)胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞.

3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境 操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天.

4. 如客戶對(duì)細(xì)胞的種類 純度 活性等特性有疑問,需提供相應(yīng)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果作為依據(jù).

二 細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā).技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā).

三 細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā)；

7. 視具體情況而定.

注意：若對(duì)細(xì)胞鑒定存在爭(zhēng)議,可以在收到細(xì)胞3個(gè)月內(nèi)提供真實(shí)有效的STR檢測(cè)證明,本公司承諾無條件退還細(xì)胞款項(xiàng),其他情況本公司將不予受理. 小鼠原B細(xì)胞株BA/F3培養(yǎng)說明書