試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）ELISA檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）.往預(yù)先包被人冠狀病毒抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本 HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌.用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,與CUT OFF值相比較,從而判定標(biāo)本中冠狀病毒抗體（Coronaviruses-Ab）的存在與否.

樣品收集 處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離.

2.  血漿：EDTA 檸檬酸鹽或肝素抗凝.3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清.

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物.

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎.3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清.

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍.

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘.從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正�，F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用.

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封（低溫干燥）保存.

3.  預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋,直接取50μL加樣即可.

4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間 加液量及順序進(jìn)行溫育操作.

5.  所有液體組分使用前充分搖勻.

試劑盒組成

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水.

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次.

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次.

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃.

2.  設(shè)置陰 陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,陰 陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照各50μL；

3.  待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL,樣本稀釋液40μL；

4.  隨后陰 陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min.

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）.

6.  每孔加入底物A B各50μL,37℃避光孵育15min.

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值.

結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15.

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,樣品為陽(yáng)性

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效.

2.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng).

3.  重復(fù)性：板內(nèi) 板間變異系數(shù)均小于15%.

4.  貯藏：2-8℃,避光防潮保存.

5.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé).

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān).