本試劑盒僅供研究使用.       

1 使用目的：

本試劑盒用于魚 蝦和肉類組織（如雞 牛肉和豬肉）,雞蛋 蜂蜜 牛奶等樣本中呋喃西林代謝物（SEM）殘留的定量檢測.

2 實驗原理

本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有呋喃西林代謝物（SEM）偶聯(lián)抗原,加入呋喃西林代謝物（SEM）標準品或樣品,游離呋喃西林代謝物（SEM）與微孔條上預包被的呋喃西林代謝物（SEM）偶聯(lián)抗原互相競爭抗呋喃西林代謝物（SEM）抗體酶標記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標儀在450nm波長下進行檢測,吸光值與樣品中呋喃西林代謝物（SEM）含量成反比,通過標準曲線計算樣品中呋喃西林代謝物（SEM）的含量.  

3 試劑盒組成

3.1 預包被的呋喃西林代謝物（SEM）偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）.

3.2 呋喃西林代謝物（SEM）標準品：6瓶（1ml/瓶）,含量分別是： 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb.

3.3抗呋喃西林代謝物（SEM）抗體酶結合物：1瓶（6ml）.

3.4顯色液A：1瓶（6ml）.

3.5顯色液B：1瓶（6ml）.

3.6終止液：1瓶（6ml）,2M硫酸.

3.7樣本稀釋液：1瓶（10×,  6ml）,用于樣品稀釋用.

3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×,20ml）,用于洗板.

3.9說明書一份.

4 需要而未提供的材料

4.1 設備

4.1.1波長450nm酶標儀.

4.1.2粉碎機.

4.1.3量筒.

4.1.4振蕩器.

4.1.5漏斗.

4.1.6Whatman No 1或相當?shù)臑V紙.

4.1.7微量移液器.

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水.

4.2.2 甲醇.

5 貯存 呋喃西林代謝物（SEM）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存

6 注意事項

6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書.

6.2 不要使用過期試劑盒.

6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫（25±2℃）,建議至少回溫2小時.

6.4 標準品中含有呋喃西林代謝物（SEM）,使用時應特別注意,操作時應帶手套.

6.5 終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物.

6.6 不同標準品 樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果.

6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品 樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結果.

6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果

6.9 混合試劑時應避免起泡.

7 工作液準備

7.1 呋喃西林代謝物（SEM）標準品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用

7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用

7.3 顯色劑：已備用,避免光線直照

7.4 反應終止液：已備用

8 樣品處理程序（樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現(xiàn)結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）

8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強力振蕩3分鐘

8.3用Whatman No 1濾紙過濾

8.4取25µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）

9 酶免分析步驟

9.1 實驗須知

9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃）,時間約2小時.回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度.

9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

9.1.3 請不要改變分析程序

9.1.4 請使用精確的微量移液器

9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序

9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作

9.1.7 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣

9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面

9.2 分析步驟

9.2.1 預先進行編號,標記B0 標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測

9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆）,將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 樣品稀釋液（10×） 濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）

9.2.4 在B0孔中加入50µl  0.0 ppb標準品溶液

9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液

9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗呋喃西林代謝物（SEM）抗體酶結合物

9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘.

9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差）

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體.

9.4 反應

9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B；輕微晃動反應板使之徹底混勻

9.4.2 37℃溫浴10min

9.4.3 每孔中加入50µl終止液,混勻

9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取.

10 結果計算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%,即百分吸光度值.

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ppb標準溶液的平均吸光度值

10.1.2以呋喃西林代謝物（SEM）濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖.根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為呋喃西林代謝物（SEM）濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中呋喃西林代謝物（SEM）濃度C（ppb）

10.1.3由于樣品經(jīng)過了預先稀釋,因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù).

10.2 半定量測定

10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值.

10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行,根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值.

11 特異性

物質 交叉反應

呋喃西林代謝物 ————— 100%

12 試劑盒參數(shù)

本試劑盒檢測下限為0.05ppb 

B0吸光度最佳值應大于1.0

試劑盒吸光度板內誤差小于8％,板間誤差小于15％.

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％.

13

試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb.

14 分析限制

本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證.