發(fā)布時間：2024/11/6 9:46:39 閱讀次數(shù)：136
產(chǎn)品及特點
藕淀粉源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒新產(chǎn)品推薦可用于檢測藕淀粉源性成分.現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味 道 氣味 色澤 紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)?/span> 進行準(zhǔn)確的鑒定.同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源 檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障.本產(chǎn)品是根據(jù)探針法熒光定量 PCR 原理 開發(fā)的藕淀粉源性成分檢測試劑盒,它具有下列特點：
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板.
2. 引物等組分經(jīng)過優(yōu)化,靈敏度高.
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品.
4. 特異性高,引物是根據(jù)藕淀粉源性成分 DNA 序列高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他 生物樣本的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng).
5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測.用于定量檢測時線性范圍至少為5 個數(shù) 量級.
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng).
7. 本產(chǎn)品只能用于科研.
成分規(guī)格
| 產(chǎn)品組成 | 編號 | 規(guī)格 |
| 2 × Probe qPCR Mix | GZ020701 | 550 μL |
| DEPC-H2O | GZ070401 | 1 mL |
| 熒光模板稀釋液 | GZ070407 | 1 mL |
| 藕淀粉源性成分 qPCR 引物-探針混合液 | GZ01515460yp | 260 μL |
| 藕淀粉源性成分 qPCR 陽性對照 ( 1×10E8 拷貝/μL) |
GZ01515460pc |
50 μL |
保存條件
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年.陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試 劑.
藕淀粉源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒新產(chǎn)品推薦使用方法
一 DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個樣品待提取,最好設(shè)置 N+2 個提取,多出的是 PC（樣品制 備陽性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）.可以取陽性對照的 1000 倍稀釋液 10μL 再加 上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為 PC .另外用水作為 NC.
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA ,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容.
二 稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,避免污染樣 品或本試劑盒的其他成分）.
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7 ,6 ,5 ,4 ,3 ,2.
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液,（最好用帶芯槍頭,下同）.
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供) ,充分震蕩 1 分鐘, 得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品.放冰上待用.
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得) ,充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品.放冰上待用.
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得) ,充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品.放冰上待用.
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品.放冰上待用. 若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可.
三 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
準(zhǔn)備足量的 qPCR 管(待檢樣品 陰性對照 陽性對照) ,向各 qPCR 管中分別加入下 列成分.
| 成分 | 待檢樣品管 | qPCR 陰性對照 | qPCR 陽性對照 |
| 2 × Probe qPCR Mix | 各 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 藕淀粉源性成分 qPCR 引物-探針混 合液 | 各 5 μL | 5 μL | 5 μL |
轉(zhuǎn)移至樣本準(zhǔn)備區(qū).
四 添加模板(模板添加區(qū))
向 qPCR 管中分別加入 5 ul 模板,順序為陰性對照（DEPC-H2O） 待測樣品模板 藕淀粉源性成分 qPCR 陽性對照,離心 30 秒,立即進行擴增反應(yīng).
五 擴增反應(yīng)(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))
將 qPCR 管放置在 qPCR 擴增儀器樣品槽相應(yīng)位置,進行擴增,擴增程序如下：
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
| qPCR 反應(yīng) （45 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
| 60℃ | 20 sec | |
| 信號通道 | FAM 通道采集熒光信號 | |
六 結(jié)果分析
1. 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線.再以待測樣品的 Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,推算出其濃 度.
2. 如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果：
陽性對照（1×10E5 拷貝/μL）結(jié)果：Ct 值<30,有明顯指數(shù)增長,呈典型的 S 型曲線. 陰性對照結(jié)果：Ct 值>40 或無 Ct值,無明顯指數(shù)增長期和平臺期.
樣本檢測結(jié)果：Ct 值<38,有明顯指數(shù)增長,表明樣本中檢測出藕淀粉源性成分,結(jié) 果為陽性；Ct 值>40 或無 Ct值,表明樣本中未檢測出藕淀粉源性成分,結(jié)果為陰性；Ct 值在 38-40 范圍,應(yīng)對樣本進行復(fù)檢,如重復(fù)實驗結(jié)果 Ct值仍在 38-40 范圍,有明顯指 數(shù)增長,則判定為陽性,否則為陰性.
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