細(xì)胞名稱
COLO320DM人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
圓形有折光
生長特性
半貼壁半懸浮
傳代方法
1:2傳代
傳代情況
2~3天換液
培 養(yǎng) 基
1640+10%FBS
培養(yǎng)體系
溫度：37℃ ； 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞描述
通過STR檢測
該細(xì)胞可產(chǎn)生5-羥色胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、ACTH和甲狀旁腺素。角蛋白、波形蛋白弱陽性
凍存條件
無血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞收到后處理：
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
懸浮瓶裝細(xì)胞，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火，將整瓶細(xì)胞懸液分別離心（1000rmp 5min）后收集于離心管中，視其離心后的細(xì)胞量進(jìn)行放回培養(yǎng)或分離培養(yǎng)。
半懸浮瓶裝細(xì)胞，先將培養(yǎng)瓶外表面用酒精擦拭干凈，鏡檢細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，請將細(xì)胞整瓶放于培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2小時后拿出，瓶蓋開啟前請將培養(yǎng)瓶瓶口再次消毒、過火，將整瓶細(xì)胞懸液中的上層懸浮細(xì)胞離心（1000rmp 5min）后收集于離心管中，重懸細(xì)胞后放回原瓶與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng)至傳代。重懸上層懸浮細(xì)胞時必須保持下層貼壁細(xì)胞的營養(yǎng)條件，防止貼壁細(xì)胞缺乏營養(yǎng)。
