1 原理及用途
本產(chǎn)品應(yīng)用競爭抑制膠體金免疫層析的原理制成,用于檢測魚蝦組織、水樣等樣品中的喹諾酮(Malachite Green,MG)。
樣本溶液滴入金標微孔后,樣本溶液中的喹諾酮與金標抗體相結(jié)合,從而阻止金標抗體與纖維素膜上喹諾酮偶聯(lián)物結(jié)合。
2 技術(shù)指標
2.1樣本檢測下限
喹諾酮(顯性)…………………1ppb(ng/ml)
喹諾酮(隱性)…………………1ppb(ng/ml)
3 試劑盒組成
序號 | 名稱 | 20T/盒 | 10T/盒 |
1. | 檢測卡(含金標微孔) | 20個 | 10個 |
2. | 提取劑1 | 1瓶 | 1瓶 |
3 | 試劑1 | 1瓶 | 1瓶 |
4. | 氧化劑 | 1瓶 | 1瓶 |
5. | MG復(fù)溶液 | 1瓶 | 1瓶 |
6. | 說明書 | 1份 | 1份 |
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl
4.3 試劑:乙腈
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液:無
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 水樣
1)取60ul待檢水樣品與60ul復(fù)溶液混勻,備用。
5.3.2 魚蝦組織
(建議蝦要去掉頭和殼后徹底清洗干凈,魚要去鱗后取魚背部油脂較少的部位進行實驗,樣本應(yīng)當避光冷藏保存)
1)取切碎的一定量的去脂肪組織樣本,用均質(zhì)機均質(zhì)(剪刀剪碎);
2)稱取 4g±0.1g均質(zhì)物于配套15ml離心管中;
3)向上述離心管中加入2ml 試劑1溶液,劇烈振蕩2min,依次加入提取劑1溶液150ul,乙腈溶液4ml,擰緊蓋帽劇烈振蕩2min,室溫下4000 r/min 離心5min;
4)此時離心管底部為組織樣本均質(zhì)物,移取上層清液2ml于5ml離心管中,加入100ul氧化劑,平行輕搖混勻30秒,65℃下,利用氮吹儀或吹風機吹干。
5)向吹干的離心管中加入0.3mlMG復(fù)溶液,反復(fù)吹打1min,充分復(fù)溶離心管底部及內(nèi)壁固體殘留物,吸取120ul(約4-5滴)溶液,此溶液為待檢液。
6 實驗步驟
6.1 撕開檢測卡鋁箔包裝袋,取出試劑板,放于平整、潔凈的臺面上。
6.2 取已準備好的待測樣本溶液120ul(5-6滴)加入到金標微孔中,等待反應(yīng)2分鐘后,用滴管吹打至完全溶解孔內(nèi)紫紅色物質(zhì),再等待2分鐘,吸取孔內(nèi)90ul(4-5滴)溶液滴加到加樣孔中,加樣后開始計時;
6.3 按室溫下放置5-8分鐘判斷結(jié)果,30分鐘后結(jié)果判讀無效。
7 結(jié)果判斷
陰性(-):在檢測窗內(nèi),對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)顯色與對照線一致或更深,表明樣本中喹諾酮殘留濃度低于1ppb或無喹諾酮殘留。
陽性(+):在檢測窗內(nèi),對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)不顯色或比對照線淺(備注:5分鐘后,T線明顯顯綠色的可判定為陽性),表明樣本中喹諾酮殘留濃度高于1ppb。
無效:在檢測窗內(nèi),對照線(C)不出現(xiàn)紫紅色線。
8 注意事項
8.1 過期或鋁箔袋破損的產(chǎn)品,均不可使用。
8.2 檢測卡從冰箱中取出時應(yīng)恢復(fù)到室溫后打開,打開的檢測卡應(yīng)盡快使用以免受潮后失效。
8.3 不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。
8.4 取液滴管不可混用,以免交叉污染。
8.5 待檢樣品溶液需清亮、無混濁顆粒、無細菌污染,否則容易導致阻塞、顯色不明顯等異,F(xiàn)象,從而影響實驗結(jié)果的判定。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-30℃干燥環(huán)境下保存。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。