產(chǎn)品特點：
由于糞便中有機(jī)質(zhì)含量豐富，對 RT-PCR 等后續(xù)反應(yīng)有極大的抑制作用，
所以從糞便中提取高純度的 RNA 一直是十分棘手的問題。本產(chǎn)品是在天澤基
因糞便 RNAout 基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式糞便 RNA 提取產(chǎn)品，
柱式糞便RNA提取試劑盒（柱式糞便RNAout）具有下列特點：
1. 操作比非柱式法更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十幾分鐘。
2. 去污染效果好，RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右。
3. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實驗。
4. 性價比高于進(jìn)口的柱式糞便 RNA 提取產(chǎn)品。
5. 試劑無毒無害, 環(huán)保。
運輸及保存 常溫運輸和保存，溶液 B 長期保存需要放 4℃，
有效期一年。 自備試劑 氯仿。
使用方法：
1. 稱取 0.5-1 g 糞便放入到含液氮的研缽中，迅速將凍成固體的糞便研磨成
粉末后。
2. 將粉末轉(zhuǎn)移到 5-15mL 的塑料離心管中（不能使用玻璃離心管），加入 1
mL 65℃預(yù)熱的溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。
3. 將勻漿物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5mL 塑料離心管中。
4. 在離心管中加入 0.3 mL 的溶液 B（溶液 B 用前需要搖勻，呈渾濁狀）和
0.2 mL 自備氯仿，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁
狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5. 室溫 13000 g 離心 3 分鐘，兩相間將有約 5-10 毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，下層有機(jī)
相和中間層含有 DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。最好留下
100 uL 上清液不取。
7. 加入等體積的溶液 C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生，千萬不要去掉沉
淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000g
室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，
13000g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用
洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
11. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫
液，室溫放置 1-2 分鐘。
13. 13000g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用
或存放于-80℃待用。
14. RNA 完整性的電泳檢測：由于糞便 RNA 含有腸道上皮細(xì)胞和腸道細(xì)菌的
RNA，它們的分子量大小不一，所以電泳時不會形成清晰的條帶。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：通過OD260的光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260
的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA
產(chǎn)量/糞便的用量)。
16. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之
間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分
別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。
