一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于經(jīng)過固定和洗滌的細(xì)胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應(yīng)，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細(xì)胞。
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。
注：FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫，實(shí)際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。
本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色明亮，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。(2)特異性：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。(3)快速：僅需約1-2個(gè)小時(shí)即可完成。(4)方便：只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進(jìn)行多步操作。(5)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。(6) 實(shí)測(cè)效果好：參考圖1，本試劑盒的實(shí)際檢測(cè)效果和國(guó)外同類產(chǎn)品相當(dāng)。
圖1. 本產(chǎn)品的檢測(cè)效果以及和Roche公司同類產(chǎn)品檢測(cè)效果的比較。A. 的本試劑盒和Roche公司同類試劑盒分別檢測(cè)正常HeLa細(xì)胞和經(jīng)DNase I處理的HeLa細(xì)胞的效果圖，圖中的綠色熒光為TUNEL染色陽性細(xì)胞。B. 本試劑盒和Roche公司同類試劑盒分別檢測(cè)正常HeLa細(xì)胞和經(jīng)10μM喜樹堿(Camptothecin)處理24小時(shí)的HeLa細(xì)胞的效果圖。無論是經(jīng)DNase I處理的陽性細(xì)胞樣品，還是使用10μM喜樹堿處理的陽性細(xì)胞樣品，本試劑盒和Roche公司的同類試劑盒的效果相當(dāng)。本圖中的染色實(shí)驗(yàn)均在12孔板中進(jìn)行。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測(cè)條件，實(shí)際獲得的結(jié)果可能有較明顯的差別。
TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。
極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。
本試劑盒足夠檢測(cè)20個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C1086-1 | TdT酶 | 100μl |
| C1086-2 | 熒光標(biāo)記液 | 900μl |
| C1086-3 | TdT酶稀釋液(選用) | 500μl |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，熒光標(biāo)記液需避光保存。
注意事項(xiàng)：
需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)，用于固定的4%多聚甲醛或向公司客服訂購(gòu)免疫染色固定液(P0098)，同時(shí)需自備含0.3% Triton X-100的PBS或向公司客服訂購(gòu)免疫染色強(qiáng)力通透液(P0097)。
如果用于石蠟切片的檢測(cè)，需自備蛋白酶K，二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以聯(lián)系公司客服
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
