TMB顯色液(ELISA HRP顯色用)(TMB Chromogen Solution for ELISA, TMB Substrate Solution for ELISA or TMB
Solution for ELISA)是一種采用了最新單一溶液TMB顯色技術(shù)，通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化TMB顯色，用于ELISA等的顯色液。本顯色液也可以用于檢測(cè)血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
      通常的TMB顯色試劑由多個(gè)組份組成，必須在使用前進(jìn)行配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對(duì)不太方便，并且也容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不太穩(wěn)定。本TMB顯色液采用了最新的TMB顯色技術(shù)，把所有的相關(guān)試劑全部配制在一個(gè)溶液中，僅由單一溶液組成，簡(jiǎn)化了操作步驟，并且使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
      TMB，即3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根過(guò)氧化物酶的常用底物。在辣根過(guò)氧化物酶或其他適當(dāng)過(guò)氧化物酶的催化下，TMB會(huì)產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物。藍(lán)色產(chǎn)物通常可以在370nm或620-650nm測(cè)定吸光度。不同濃度辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗使用本產(chǎn)品的檢測(cè)效果參見(jiàn)圖1。

      圖1. 不同濃度辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗使用本產(chǎn)品的檢測(cè)效果圖。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (A0208)用PBS稀釋至圖中所示濃度，各取20微升，加入200微升本產(chǎn)品，分別在5分鐘和30分鐘時(shí)檢測(cè)A370。從結(jié)果可知，5分鐘時(shí)，HRP濃度在0-0.1%范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系；30分鐘時(shí)，HRP濃度在0-0.06%范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)會(huì)因試劑、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

      辣根過(guò)氧化物酶催化TMB顯藍(lán)色后可以使用TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)、TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性) (P0217)或自行配制的2M H2SO4終止反應(yīng)。加入TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸)或硫酸后，溶液呈黃色，此時(shí)可以在450nm測(cè)定吸光度；加入TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性)后，溶液保持藍(lán)色不變，此時(shí)可在620-650nm測(cè)定吸光度。兩種TMB顯色終止液加入后的吸光度檢測(cè)和實(shí)拍顯色效果圖參考圖2和圖3。

      圖2. 不同濃度辣根過(guò)氧化物酶加入本產(chǎn)品后，再使用TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)終止反應(yīng)后的檢測(cè)效果圖。左圖為不同濃度的HRP標(biāo)記的二抗(A0208 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (H+L))，加入本產(chǎn)品室溫反應(yīng)5分鐘后A370的吸光值，及加入TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) A450的吸光值的線性圖。右圖為兩者的實(shí)拍顯色效果圖。圖中數(shù)據(jù)僅供參考，實(shí)際的檢測(cè)效果可能會(huì)略有不同。

      圖3. 不同濃度辣根過(guò)氧化物酶加入本產(chǎn)品后，再使用TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性) (P0217)終止反應(yīng)后的檢測(cè)效果圖。左圖為不同濃度的HRP標(biāo)記的二抗(A0208 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔IgG (H+L))，加入本產(chǎn)品室溫反應(yīng)5分鐘后A370的吸光值，及加入TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性) A650的吸光值的線性圖。右圖為兩者的實(shí)拍顯色效果圖。圖中數(shù)據(jù)僅供參考，實(shí)際的檢測(cè)效果可能會(huì)略有不同。

      本試劑盒最常用于ELISA檢測(cè)，也可以用于檢測(cè)血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
      用于ELISA檢測(cè)時(shí)，每個(gè)樣品通常使用0.2毫升顯色液，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品共可以檢測(cè)約500個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
      4℃避光保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
      TMB對(duì)人體有刺激性，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
      本產(chǎn)品為無(wú)色至微藍(lán)色透明溶液，如果發(fā)現(xiàn)TMB顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成較深的藍(lán)色，應(yīng)該停止使用。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1. 對(duì)于ELSIA檢測(cè)：
a. 參考ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟，在與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
b. 洗滌完畢后，去除洗滌液，加入200微升TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 直接在370nm或620-650nm測(cè)定吸光度。或加入50微升TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)或TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性) (P0217)，或自行配制2M H2SO4終止反應(yīng)，隨后在相應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。
2. 對(duì)于在96孔板內(nèi)進(jìn)行的其他適當(dāng)檢測(cè) (例如檢測(cè)組織或細(xì)胞樣品內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶)：
a. 直接在96孔板內(nèi)每孔加入10-20微升樣品。
b. 加入200微升TMB顯色液。
c. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。
d. 直接在370nm或620-650nm測(cè)定吸光度�；蚣尤�50微升TMB顯色終止液(450nm, 不含硫酸) (P0215)或TMB顯色終止液(650nm, 無(wú)腐蝕性) (P0217)，或自行配制2M H2SO4終止反應(yīng)，隨后在相應(yīng)波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。
常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 背景顯色太深。
a. 如果背景(沒(méi)有樣品的對(duì)照)顯色太深，一方面需考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，例如選購(gòu)適當(dāng)?shù)姆?/span>閉液或使用和一抗相同來(lái)源的血清(10%)進(jìn)行封閉。另一方面，請(qǐng)選購(gòu)經(jīng)過(guò)適當(dāng)吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
b. 可以考慮縮短顯色時(shí)間，或降低二抗?jié)舛�。另外，選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液，或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間也會(huì)有所幫助。
2. 沒(méi)有顯色或顯色太弱。
a. 適當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測(cè)二抗效果，滴一滴稀釋二抗在離心管內(nèi)，檢測(cè)二抗是否可以被正常顯色。
b. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測(cè)體系，例如使用生物素檢測(cè)體系。
c. 可以適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。
d. 如果上述改進(jìn)不能獲得預(yù)期效果，可以考慮更換效果更好的一抗或ELISA試劑盒。​