產(chǎn)品簡介:
MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法，MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測,MTT檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色Formazan并沉積在細胞中，而死細胞無此功能，在特定溶劑存在的情況下可以被完全溶解，然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度，細胞增殖越多越快，則吸光度越高;細胞毒性越大，則吸光度越低。雅吉生物 MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒采用了自主研發(fā)FormazanSolvent，使檢測本底低，靈敏度高，線性范圍寬。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料:
1、細胞培養(yǎng)液、胰蛋白酶消化液
2、低速離心機、96孔培養(yǎng)板、細胞計數(shù)板或計數(shù)器、搖床、顯微鏡、酶標儀
操作步驟(僅供參考):
1、細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期,常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需消化)。
2、低速離心，收集細胞沉淀。
3、用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。
4、細胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000個細胞/孔，通常細胞增殖實驗每孔加3000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入6000個細胞，具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。
5、37℃ 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6~24h。
6、按照實驗具體要求，給予0～20ul干預(yù)藥物處理，37°C 5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。
7、棄培養(yǎng)液，每孔加入10ul MTT Solution和100ul新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4h。
8、棄培養(yǎng)液，每孔加入110ul Formazan Solvent，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解;如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時間會短一些;如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時間會長一些。
9、在酶標儀570nm測定各孔吸光度。
注意事項:
1、MTT Solution(5mg/ml)為黃色，需避光保存，長時間光照會導(dǎo)致失效。盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。
2、由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。
3、MTT Solution在低溫情況下會凝固，置于室溫或20～25°C℃水浴至全部融解后使用。
4、Formazan Solvent 可以-20°C儲存，當產(chǎn)生沉淀或凝固時可以37C水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。
5、觀察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。6、培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。
7、應(yīng)注意設(shè)立OD調(diào)零孔和對照。
8、試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實驗效果。
9、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12個月有效。
低溫運輸,按要求保存。
