中性紅細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(Neutral Red Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一種基于細胞對于中性紅的攝入能力來檢測細胞增殖或細胞毒性的試劑盒。
細胞對中性紅的攝入取決于細胞對pH梯度的維持能力，而這種能力是通過產生ATP來維持的。在生理pH條件下，中性紅染料的凈電荷幾乎為零，從而使其能通過非離子被動擴散的方式穿透細胞膜進入細胞。溶酶體(lysosomes)中的質子梯度使溶酶體中的pH值低于細胞質，從而可以使中性紅帶上電荷并在溶酶體中積累。在細胞增殖加快時，細胞數(shù)量增多，可以攝入的中性紅的量就會增加。在細胞受到損傷時，中性紅的攝入能力會下降。經(jīng)過一定時間攝入后，細胞經(jīng)清洗并用裂解液裂解即可釋放中性紅而用于檢測。這樣通過測定細胞對于中性紅的攝入量，就可以確定細胞的增殖或毒性情況。
中性紅同時也是一種pH指示劑，在酸性時呈紅色，在pH6.8升至pH8.0時由紅色逐漸轉變?yōu)辄S色。對于活細胞，中性紅積累在溶酶體中，而溶酶體中是酸性環(huán)境，因此溶酶體被中性紅染成紅色。本產品中的中性紅染色液對正常培養(yǎng)的L929細胞的染色效果參考圖1。
圖1. 正常培養(yǎng)的L929細胞加入中性紅染色液后的染色效果。
中性紅的分子式為C15H17CIN4，分子量為288.8，CAS Number為553-24-2。
本試劑盒可以用于檢測500個樣品。
包裝清單：
| 產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
| C0013-1 | 中性紅染色液 | 10ml |
| C0013-2 | 中性紅檢測裂解液 | 100ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。中性紅染色液需避光保存。
注意事項：
需準備一臺可以測定A540的酶標儀或微量分光光度計。
第一次使用本試劑盒時建議先取少量樣品做好預實驗。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 把細胞培養(yǎng)在96孔培養(yǎng)板內，每孔加入200微升細胞培養(yǎng)液，設置適當?shù)年幮詫φ蘸完栃詫φ眨⒔o予藥物刺激。
2. 至待檢測時間點，如果培養(yǎng)液中的藥物推測不會對后續(xù)檢測產生干擾，直接加入20微升中性紅染色液；如果培養(yǎng)液中的藥物可能會對后續(xù)檢測產生干擾，先用PBS、DPBS或HBSS等適當溶液洗滌1-2次，隨后加入200微升細胞培養(yǎng)液，并加入20微升中性紅染色液。
3. 細胞培養(yǎng)箱內孵育2小時。注：對于細胞密度非常低，細胞代謝速率非常慢的情況，可以把孵育時間延長到3-4個小時。
4. 去除含有中性紅染色液的細胞培養(yǎng)液，用PBS、DPBS或HBSS等適當溶液洗滌1-2次。
5. 加入200微升中性紅檢測裂解液，室溫搖床上裂解10分鐘。在搖床上搖動可以促進樣品的裂解。
6. 測定樣品的A540，可以選擇690nm作為參考波長。
圖2. 本產品對L929細胞進行檢測的效果圖。實測數(shù)據(jù)會因細胞種類、細胞狀態(tài)、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
常見問題：
1. 中性紅染色液長期存放會產生沉淀。可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用針頭濾器等過濾去除沉淀后繼續(xù)使用，不會影響使用效果。因為染色液中的中性紅本來就是過量的。
2. 96孔板在細胞培養(yǎng)過程中會存在蒸發(fā)問題。在加入中性紅染色液前，如果培養(yǎng)液存在明顯的蒸發(fā)問題，會影響細胞的生長狀態(tài)，并嚴重影響后續(xù)的檢測結果。
