BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一種用于免疫組化顯
色、Western等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS鑒定等的試劑盒。
堿性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)常被稱作堿性磷酸酶(EC 3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等，并在堿性條件下最為有效。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline
Phosphatase, CIAP/CIP)被廣泛用于二抗等的標(biāo)記最終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸
化(去單磷酸化)，特別是質(zhì)粒的5’末端去磷酸化以避免質(zhì)粒自連等。
BCIP/NBT是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會(huì)和NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。
本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS的鑒定，也可以用于Western等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。
有Nature論文注明使用了本試劑盒，參考使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)2。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| C3206-1 | 堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 100ml |
| C3206-2 | BCIP溶液(300X) | 350μl |
| C3206-3 | NBT溶液(150X) | 700μl |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
4℃保存，一年有效。BCIP溶液和NBT溶液需避光保存。
注意事項(xiàng)：
BCIP對人體有刺激性，NBT對人體有害，請注意適當(dāng)防護(hù)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 對于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。對于檢測內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
| 堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 3ml | 10ml |
| BCIP溶液(300X) | 10μl | 33μl |
| NBT溶液(150X) | 20μl | 66μl |
| BCIP/NBT染色工作液 | 3.03ml | 10.1ml |
3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育5-30分鐘或更長時(shí)間(可長達(dá)24小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。
6. 對于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。
