細(xì)胞凋亡－Hoechst染色試劑盒(Hoechst Staining Kit)為您提供了一種經(jīng)典而又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮。所以Hoechst 33258染色后，在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。典型的Hoechst 33258染色后的細(xì)胞圖片參考下圖。

正常細(xì)胞核	刺激后有致密濃染的凋亡細(xì)胞

只需25分鐘即可完成細(xì)胞凋亡檢測(cè)的整個(gè)過程。
本試劑盒提供了固定液，染色液，及抗熒光淬滅封片液。
本試劑盒對(duì)貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和組織切片均適用。
足夠檢測(cè)100個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存，半年有效。
注意事項(xiàng)：
需可以觀察藍(lán)色熒光的熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
需PBS或0.9%NaCl溶液。
需自備蓋玻片與載玻片。蓋玻片與載玻片聯(lián)系客服訂購
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。可以向選購各種型號(hào)的載玻片存儲(chǔ)盒。
在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1．貼壁細(xì)胞
a.取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。
b.刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml 固定液，固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。
c.去固定液，用PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
d.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
e.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
f.滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片液，盡量避免氣泡。
g.熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右，圖譜請(qǐng)參考下圖。
2.懸浮細(xì)胞
a.離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)，加入0.5ml 固定液，緩緩懸起細(xì)胞，固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。
b.離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
c.離心后吸去大部分液體保留約50μl液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。
d.稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。
e.均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
f.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
g.滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
h.熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右，圖譜請(qǐng)參考下圖。
3.組織切片
a.常規(guī)包埋切片后，根據(jù)切片的不同類型，處理至可以用于免疫組化染色。
b.PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)�？稍诹�孔板中操作。
c.加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
d.去染色液，用PBS或0.9%NaCl 洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。
e.小心將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
f.熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右，圖譜請(qǐng)參考下圖。

                                     Hoechst 33258的吸收光譜和發(fā)射光譜，左側(cè)峰為吸收光譜，右側(cè)峰為發(fā)射光譜。

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