| 來源 | 用途 | 交叉反應(yīng)性 | 抗體識(shí)別位點(diǎn) | Histone H3分子量 |
| Rabbit | WB, IF | H | Histone H3 N-terminal | ～17kD |
WB, Western blot; IF, Immunofluorescence.
H, human.
本Histone H3抗體(Histone H3 antibody)為進(jìn)口分裝，用人工合成的人histone H3氨基端aa 1-20該段多肽進(jìn)行適當(dāng)修飾后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽親和柱經(jīng)過兩步純化得到的高純度抗體。
本Histone H3抗體識(shí)別的是總histone H3(total histone H3)，可檢測內(nèi)源性的Histone H3，未發(fā)現(xiàn)和其它組蛋白有交叉反應(yīng)。
組蛋白histone H2A，H2B，H3和H4各兩個(gè)分子組成的八聚體和與該八聚體相結(jié)合的DNA構(gòu)成了染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)核小體
(necliosome)。組蛋白的存在確保了基因組DNA可以被相對(duì)致密而有序地堆放在細(xì)胞核中。人一個(gè)細(xì)胞的基因組DNA完全拉成線性的總長度約為1.4米，但染色質(zhì)的總長度僅為9厘米，而有絲分裂時(shí)染色體的總長度僅為0.12毫米。除了核心組蛋白(core
histone)histone H2A，H2B，H3和H4外，還有一類linker histone H1和H5。Histone H1可以結(jié)合核小體和DNA在核小體中進(jìn)出的位點(diǎn)，從而使DNA的位置被鎖定，有利于在核小體基礎(chǔ)上形成更高級(jí)的空間結(jié)構(gòu)(參考下圖)。組蛋白結(jié)合區(qū)域的DNA長度為147bp，核小體間的DNA長度大約為50bp。染色質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的松散還是致密很大程度上決定了該區(qū)域基因轉(zhuǎn)錄水平的高低(參考下圖)。
組蛋白是真核生物中呈強(qiáng)堿性的蛋白。組蛋白可以被乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化修飾。這些修飾會(huì)改變?nèi)旧|(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，從而在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色體裝配等過程中起重要作用。通常，histone H2B的Lys5，Lys12和Lys15會(huì)發(fā)生乙�；揎�。
Histone H3的Lys9，Lys14，Lys18和Lys23會(huì)發(fā)生乙�；揎棥istone H3的Ser10，Ser28和Thr11都會(huì)發(fā)生磷酸化修飾。Histone H3的這些磷酸化和有絲分裂或減數(shù)分裂過程中的染色質(zhì)濃縮密切相關(guān)。Histone H3 Thr3的磷酸化在很多物種中都非常保守，可以被激酶haspin所催化。Histone H3的Thr3磷酸化發(fā)生在有絲分裂早期(prophase)，在有絲分裂的晚期(anaphase)則被去磷酸化。Histone H3和H4是甲基化修飾的主要組蛋白，哺乳動(dòng)物細(xì)胞中histone H3和H4是高度甲基化的。組蛋白可以被單、雙或三甲基化(mono-, di-, and tri-methylated)，和基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色體裝配密切相關(guān)。
Histone H3在其氨基端有一個(gè)較長的N terminal tail，在核小體的裝配過程中起關(guān)鍵作用。Histone H3是各種histone中修
飾程度最高的，在表觀遺傳(epigenetics)中起重要作用。Histone H3包括H3A1、H3A2和H3A3。人的hitone H3由近15個(gè)基因
分別單獨(dú)編碼。
配套提供了Western一抗稀釋液，可以用于Western檢測時(shí)的一抗稀釋。
建議抗體使用時(shí)的稀釋比例如下(實(shí)際使用時(shí)需根據(jù)抗原水平的高低作適當(dāng)調(diào)整)：
| WB | IF |
| 1:1000 | 1:100 |
本抗體如果用于常規(guī)的Western檢測，至少可以檢測30次。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| AH433-1 | Histone H3抗體(兔多抗) | 30μl |
| AH433-2 | Western一抗稀釋液 | 30ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
Histone H3抗體-20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western一抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。
注意事項(xiàng)：
在Western實(shí)驗(yàn)后，請(qǐng)注意回收稀釋的抗體�；厥盏目贵w在進(jìn)行Western實(shí)驗(yàn)時(shí)至少可以重復(fù)使用10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，4℃保存。
回收后重復(fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長霉長菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. Western檢測：
A. 按照1:1000用提供的Western一抗稀釋液稀釋抗體。
B. 把經(jīng)過封閉的蛋白膜與稀釋好的一抗4℃緩慢搖動(dòng)過夜或室溫緩慢搖動(dòng)2小時(shí)，確保稀釋的抗體至少能在搖動(dòng)的瞬間覆蓋蛋白膜。
C. 回收稀釋的一抗，4℃保存以備下次繼續(xù)使用。
D. 按照Western的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行后續(xù)的洗滌、二抗孵育、洗滌和檢測等操作。
2. 免疫染色：
可以使用生產(chǎn)的免疫染色一抗稀釋液(P0103)稀釋抗體，使用后注意回收稀釋好的一抗，
3. 其它實(shí)驗(yàn)操作請(qǐng)自行參考適當(dāng)?shù)膒rotocol進(jìn)行。
