過碘酸-雪夫染色試劑盒(Periodic Acid-Schiff Staining Kit)，即PAS染色試劑盒，也稱糖原PAS染色液試劑盒(Glycogen Periodic Acid-Schiff Staining Kit)，是一種使用過碘酸、雪夫(Schiff)試劑對組織中糖原、粘多糖及真菌等進行染色的試劑盒。本試劑盒適用于不同組織的石蠟切片或冰凍切片、培養(yǎng)的細(xì)胞、血涂片、骨髓涂片等樣品。

過碘酸-雪夫染色，即PAS染色，因其主要用于多糖(polysaccharides)如糖原(glycogen)和粘性物質(zhì)(mucosubstances)如黏多糖(glycosaminoglycan)、黏蛋白(mucins)、糖蛋白(glycoproteins)和糖脂(glycolipids)等物質(zhì)的染色，所以也稱糖原染色(Glycogen Staining)。過碘酸-雪夫染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，McManus在1946年最先使用過碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白，該染色法不僅能夠顯示糖原還能顯示中性粘液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。另外，臨床診療中PAS染色常用于輔助淋巴細(xì)胞性白血病的診斷。

糖原是由D-葡萄糖的分支或直鏈組成的高分子多糖類化合物，糖原的合成與分解代謝主要發(fā)生在肝、腎和肌肉組織中。過碘酸是一種強氧化劑，能將組織或者細(xì)胞中的糖原及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成兩個游離醛基(-CHO)，且過碘酸的特點是不再繼續(xù)將醛基氧化成羧基。Schiff試劑(Schiff reagent)，又稱品紅亞硫酸試劑，含堿性品紅和亞硫酸，堿性品紅與亞硫酸結(jié)合后，失去醌式結(jié)構(gòu)而生成無色品紅。無色品紅與過碘酸氧化的游離醛基結(jié)合，醌式結(jié)構(gòu)恢復(fù)，生成洋紅色(magenta)產(chǎn)物，定位于胞漿，顏色深淺與多糖含量成正比。

由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學(xué)操作過程中被抽提掉，故一般組織標(biāo)本上所能顯示的糖類主要是糖原和其它多糖物質(zhì)，因此如有需要可設(shè)置對照試驗確定此洋紅色物質(zhì)是否為糖原：糖原可被淀粉酶(amylase)水解，先用淀粉酶處理后再進行PAS染色，若反應(yīng)為陰性，則表明被染色的物質(zhì)為糖原，反之則為其它多糖。

本試劑盒提供了過碘酸-雪夫(PAS)染色所需的過碘酸溶液、Schiff試劑、蘇木素染色液和鹽酸乙醇分化液等試劑，用戶只需自備梯度乙醇即可完成整個染色過程。

本試劑盒操作簡單方便，性能穩(wěn)定，染色效果明顯。本試劑盒用于小鼠小腸石蠟切片的染色效果圖參考圖1。

圖2. 過碘酸-雪夫(PAS)染色試劑盒用于小鼠小腸石蠟切片的染色效果圖。如圖所示，糖原和其它多糖被染成洋紅色，細(xì)胞核被蘇木素染色呈藍色。Scar=50µm。實際染色效果會因樣品、檢測條件的不同而略有差異，本圖僅供參考。

本試劑盒C0142S和C0142M用于切片的染色，每個切片樣品各使用100μl染色液，可以分別進行100次和500次染色。

包裝清單：

保存條件：

4℃保存，一年有效。除C0142-4 鹽酸乙醇分化液外，都需要避光保存。C0142-1 過碘酸溶液和C0142-2 Schiff試劑需要注意密封保存，并且如果短期內(nèi)不使用，推薦-20℃保存，-20℃可以保存更長時間。C0142-3 蘇木素染色液和C0142-4 鹽酸乙醇分化液都可以室溫保存。

注意事項：

過碘酸溶液和Schiff試劑應(yīng)置于4℃密封避光保存，使用時盡量避免接觸過多的光照和空氣。使用前，建議提前30分鐘取出平衡至室溫后，避光暗處使用。如果過碘酸溶液變黃或者Schiff試劑變紅則不能繼續(xù)使用。

染色過程中應(yīng)盡量縮短蒸餾水洗滌的時間，避免糖原被水洗掉。

過碘酸溶液氧化時間不宜過短或過長，氧化時的溫度以18-22℃為佳。

蘇木素染色液應(yīng)淡染，避免染色過深影響觀察效果。

染色后的分化為選做步驟，分化后細(xì)胞核染色變淺，可根據(jù)染色需求決定是否進行分化。鹽酸乙醇分化液應(yīng)經(jīng)常更換新液，其分化時間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、 組織的類別和鹽酸乙醇分化液的新舊程度而定。

本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1.樣品處理。
a.對于石蠟切片：
石蠟切片的制備：按照常規(guī)方法進行取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘片等步驟制備石蠟切片。
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
80%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
蒸餾水洗滌2分鐘。
b.對于冰凍切片：
冰凍切片的制備：按照常規(guī)方法進行取材、速凍、切片、烘片等步驟制備冰凍切片。
蒸餾水洗滌2分鐘。
c.對于血涂片、骨髓涂片：
按照常規(guī)方法制作血涂片或骨髓涂片，自然晾干。
70%乙醇固定10分鐘，蒸餾水沖洗，晾干。
d.對于細(xì)胞：
加入70%的乙醇固定10分鐘。
2.PAS染色。
a.過碘酸溶液氧化：取出過碘酸溶液并平衡至室溫，每個樣品滴加過碘酸溶液100μl，在濕盒中避光反應(yīng)10分鐘后，去除過碘酸溶液，浸泡于蒸餾水中并置于搖床洗滌5分鐘。
b.Schiff試劑染色：每個樣品滴加100μl Schiff試劑，放入濕盒中，置于37℃烘箱避光染色30分鐘~1小時。去除染色液，浸泡于蒸餾水中并置于搖床洗滌5分鐘。注：不同組織的最佳染色時間可能會有差異，請根據(jù)實際染色效果調(diào)整染色時間。
c.蘇木素染色：每個樣品滴加100μl蘇木素染色液，染色30秒。去除染色液，蒸餾水漂洗兩次以上，每次3秒鐘，直到浮色洗去。對于涂片，待適當(dāng)干燥后，即可用封片液封片，在顯微鏡下觀察。細(xì)胞可用蒸餾水洗去多余的顏色，即可在顯微鏡下拍照。
d.分化(選做)：使用鹽酸乙醇分化液分化30秒，去除分化液，自來水漂洗兩次，每次三秒鐘，自來水返藍5分鐘。
e.脫水、透明：放入90%乙醇、無水乙醇脫水各2分鐘，二甲苯兩次透明各5分鐘。
f.封片：使用中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察和拍照。​