本產(chǎn)品是北京在柱式血液RNAout(CAT#:71202)基礎(chǔ)上開發(fā)的升級產(chǎn)品,采用先裂解紅細(xì)胞后純化白細(xì)胞,再從中分別提取總RNA和DNA的策略。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 本產(chǎn)品可用于血液RNA提取、血液DNA提取以及DNA和RNA雙提,充分利用寶貴的血液樣品。
2. 無需使用有毒的酚和氯仿,綠色環(huán)保。
3. 采取先裂解紅細(xì)胞的兩步法,避免了血紅素等對RNA和DNA的污染。
3. RNA直接從白細(xì)胞胞漿中提取,徹底避免了細(xì)胞核基因組DNA的污染。
4. 純度高,RNA的OD260/280均在2.0左右,DNA的OD260/280均在1.8-1.9左右。
5. 產(chǎn)率高,新鮮血液樣品RNA產(chǎn)率一般為5-50 ug/mL,DNA的產(chǎn)率一般在
5-8 ug/mL。對凍存血,RNA和DNA產(chǎn)率跟凍存時(shí)間密切相關(guān),波動極大。
6. 與常用的抗凝劑(包括肝素,EDTA,檸檬酸鈉,草酸鈉)兼容。
7. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。所得的DNA可直接用于PCR、酶切等實(shí)驗(yàn)。
8. 如果需要提取細(xì)胞核中的RNA前體,或者提取胞漿中線粒體DNA,則不能使用本方法。
用本產(chǎn)品提取0.75 mL人新鮮全血RNA和DNA。RNA溶于50 μL RNA洗脫液中,其中10 μL與15 μL RNAon混合后在甲醛瓊脂糖變性膠上電泳0.5小時(shí),直接在紫外燈下觀察并照相(A圖); DNA溶于50 μL DNA洗脫液2.0中,上樣體積為
5 μL,最右在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察
(B圖),使用的染料為綠如藍(lán)染料,電泳緩沖液為超快電泳液(產(chǎn)品編號:51210)。