DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit)是一種借助辣根過氧化物酶(HRP)，用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜顯色的試劑盒。
DAB，即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride，是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶的催化下，DAB會產(chǎn)生棕色沉淀。該棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后，還可以使用溶于乙醇的染料進行后續(xù)染色。
本試劑盒可以用于細胞或組織在免疫組化或原位雜交時結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色，也可以用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。
用于免疫組化或原位雜交時，如果每個片子使用0.2毫升顯色液，那么本試劑盒共可以檢測100個片子。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0202-1 | DAB顯色液A | 10ml |
| P0202-2 | DAB顯色液B | 10ml |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。DAB顯色液A和DAB顯色液B均需避光保存。
注意事項：
DAB對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 對于組織切片或細胞樣品或膜，在與辣根過氧化物酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成DAB染色工作液：
| DAB顯色液A | 0.5ml | 5ml |
| DAB顯色液B | 0.5ml | 5ml |
| DAB染色工作液 | 1ml | 10ml |
3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量DAB染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育3-30分鐘或更長時間(可長達24小時)，直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 去除DAB染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。
6. 對于組織切片或細胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。
常見問題：
1. 背景顯色太深。
a. 在免疫組化時如果背景顯色太深，一方面需考慮使用適當?shù)姆忾]液進行封閉，例如選購適當?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進行封閉。另一方面，請注意選購經(jīng)過適當吸附的二抗，以減小二抗的非特異性吸附。
b. 在免疫組化時如果背景顯色太深，需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶。可以在4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫，混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。
c. 可以考慮縮短顯色時間，或降低二抗?jié)舛�。另外，選擇適當強度的洗滌液，或延長洗滌時間也會有所幫助。
2. 沒有顯色或顯色太弱。
a. 可以考慮適當提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果，滴一滴稀釋二抗在膜上，檢測二抗是否可以被正常顯色。
b. 可以考慮使用更加靈敏的放大檢測體系，例如使用生物素檢測體系。
c. 可以適當延長顯色時間，另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。
