本產(chǎn)品是在植物DNAOUT基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式植物基因組DNA提取產(chǎn)品,可以用于多種植物基因組DNA的超純提取。
1. 純度高,不含污染和抑制劑,得到的DNA可以不經(jīng)稀釋直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting,microsatellite analysis等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
2. 產(chǎn)率一般在10-30 μg/100 mg樣品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段長(zhǎng)度一般在20-40 Kb左右。
3. 適用范圍廣,可用于絕大多數(shù)植物的各種組織,包括富含多糖的組織。
不會(huì)發(fā)生離心柱堵塞現(xiàn)象,不需要使用酚和氯仿等有毒試劑。
將約100-300 mg克剪碎的植物組織直接加到1 mL溶液A中勻漿,65℃保溫5分鐘后離心1分鐘,在上清中加入等體積溶液B,混勻后冰浴5分鐘,離心1分鐘, 在上清中加入1.5倍體積的溶液C,混勻后轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,室溫放置5分鐘后離心半分鐘,加0.1 mL膜結(jié)合RNA清除液到離心吸附柱中,室溫放置5-10分鐘,用通用洗柱液洗兩次,空甩半分鐘,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的離心管中,加0.1 mL DNA洗脫液,室溫離心1分鐘即得植物DNA溶液。
用本產(chǎn)品提取的萬(wàn)年青葉片基因組DNA的電泳圖,每個(gè)樣品使用量為100 mg葉片,最后洗脫體積均為50 μL,上樣體積為10 μL,最后在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察。使用的染料為綠如藍(lán)染料,電泳緩沖液為超快電泳液(實(shí)驗(yàn)編號(hào):304242)
使用本產(chǎn)品時(shí),能否使用液氮研磨法破碎植物組織? A:研缽一般都是二氧化硅構(gòu)成,在裂解液中會(huì)吸附核酸,故最好不要使用
用本產(chǎn)品提取的100 mg油菜葉片基因組DNA,采用液氮研磨法(左邊兩個(gè)樣品)和Polytron勻漿法(右邊兩個(gè)樣品),洗脫體積均為50μL。上樣體積為10 μL,最后在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察。使用的染料為綠如藍(lán)染料,電泳緩沖液為超快電泳液(實(shí)驗(yàn)編號(hào):304242)。