真菌DNA提取是一個難題,一是因為真菌有菌絲體、孢子等多種完全不同的結構形態(tài),二是因為其細胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品,它利用 法破碎細胞,主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內(nèi)的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細胞,屬于物理方法,遠比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學破壁法重復性好,也不容易帶入外源真菌DNA(注:文獻報道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往會造成污染)。
3. 本方法提取一個樣品只需要10余分鐘,方便、快速和高效。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養(yǎng)物,所得的基因組DNA OD260/OD280 一般都在1.8左右,長度一般在20 Kb左右,每mL菌液的DNA產(chǎn)率一般在1-3 μg?梢灾苯佑糜赑CR和酶切等后續(xù)試驗。
離心收集1-5 mL過夜培養(yǎng)的真菌細胞,加入0.5 mL 溶液A和體積相當于0.5 mL的玻璃珠(大約0.5克),振蕩器上以最高速度振蕩10分鐘,再加入0.5 mL溶液B,震蕩2分鐘,2000 rpm離心2分鐘,在上清中加入3倍體積的溶液C,上柱, 用通用洗滌液洗兩次,干甩一次,最后用50-100 μL DNA洗脫液洗脫基因組DNA 待用