線粒體DNA（mtDNA）是進行分子進化研究和母性遺傳研究的重要材料，但傳統(tǒng)的兩步式mtDNA提取方法是先溫和裂解細胞，分離線粒體，然后再從線粒體中提取mtDNA。此方法中的溫和裂解細胞的條件十分難以控制，需要針對不同組織材料單獨進行優(yōu)化。本方法克服了上述缺點，具有下列優(yōu)點：
1. 不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3-5
μg mtDNA。
4. 注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料。
使用及效果
在107個細胞或1克剪碎的組織中加入0.25 mL溶液A，吹打分散，再加入0.25 mL溶液B，混勻后冰浴8分鐘，加入0.35 mL溶液C后混勻，12000 g離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，離心1分鐘，用0.5 mL 的通用洗柱液洗兩次，最后用30-50 μL DNA洗脫液將mtDNA洗脫。
用本產(chǎn)品從新鮮豬肝中提取mtDNA，原液稀釋10000 倍后取10 μL做為PCR 模板， 分別用三對豬線粒體DNA專一性引物進行擴增， 用其中的1/2上樣電泳。電泳染料為綠如藍。
線粒體是合成ATP和脂肪酸的細胞器，每個細胞有多個線粒體，每個線粒體有多個基因組，例如每個釀酒酵母（S．cerevisiae）細胞里有20多個線粒體，人淋巴細胞有數(shù)個，肝細 胞有500-2500個，卵母細胞有上千個。除少數(shù)低等真核生物線粒體基因組為線狀DNA外，其他生物的線粒體基因組都是環(huán)狀DNA。線粒體基因組缺乏組蛋白，故無核小體。哺乳動物的線粒體基因DNA沒有內(nèi)含子，幾乎每一對核苷酸都參與一個基因的組成，有許多基因的序列是重疊的。不同物種的線粒體基因組的大小相差懸殊，在動物中的趨勢是物種越高等，mtDNA越小，排列越緊密。下表是常見物種mtDNA的大小列表
人mtDNA只有D環(huán)區(qū)（D-loop，參與復制啟動）和另外87個bp不是編碼基因外，其余序列共編碼13個蛋白質(zhì)（細胞色素b、細胞色素氧化酶的3個亞基、ATP酶的2個亞基以及NADH 脫氫酶的7個亞基）、24個rRNA（包括1個16SrRNA、1個12SrRNA和22個tRNA）。人類 的神經(jīng)肌肉變性疾病如Leber氏遺傳性視神經(jīng)病、帕金森病、早老癡呆癥、線粒體腦肌病、母系遺傳的糖尿病和耳聾等都同線粒體基因有關。
高等植物mtDNA長度在100 Kb~2000 Kb之間，大部分由非編碼的DNA序列組成，且有許多短的同源序列，同源序列之間的DNA重組會產(chǎn)生較小的亞基因組環(huán)狀DNA，與完整的“主”基因 組共存于細胞內(nèi)，因此植物線粒體基因組的研究更為困難。
與細胞核DNA相比，mtDNA具有下列特點：①突變率高，是核DNA的10-100倍左右， 有利于檢查出在較短時期內(nèi)基因發(fā)生的變化，有利于比較不同物種的相同基因之間的差別，確定這些物種在進化上的親緣關系；②母性遺傳(maternal inheritance)，這是由于動物精子的細胞質(zhì)極少，子代mtDNA基本上都是來自卵細胞，因此具有相同mtDNA序列的個體必定是來自一位共同的雌性祖先。
