分離純化環(huán)狀DNA(質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA) 的時(shí)候經(jīng)常需要去除其中的基因組DNA污染,否則會(huì)對(duì)后續(xù)的PCR、WGA和測(cè)序等反應(yīng)產(chǎn)生干擾。而基因組DNA一般都十分巨大,無(wú)論是線狀(如真核細(xì)菌基因組DNA)還是環(huán)狀(如細(xì)菌DNA),經(jīng)過(guò)常規(guī)的DNA純化過(guò)程都會(huì)變成20-50 Kb大小的線狀DNA,而上述環(huán)狀DNA一般還能保持環(huán)狀構(gòu)型。根據(jù)這一特點(diǎn),本公司開(kāi)發(fā)了專門用于去除線狀DNA的本產(chǎn)品,它有如下優(yōu)點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,不需用戶花費(fèi)大量時(shí)間去摸索各種條件。
2. 酶法去除線性DNA,使線狀DNA污染降級(jí)幾個(gè)數(shù)量級(jí),不會(huì)干擾后續(xù)試驗(yàn)。
3. 柱式法純化回收環(huán)狀DNA,能快速高效清除殘留酶,得到的DNA可直接使用。
4. 酶法處理不依賴于DNA序列,適于于任何線狀DNA。而內(nèi)切酶去除線狀DNA則需要預(yù)先確知其在環(huán)狀DNA上沒(méi)有酶切位點(diǎn)。
5. 適用的環(huán)狀DNA包括質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、環(huán)狀病毒DNA等。
6. 得到的環(huán)狀DNA可用于多種后續(xù)試驗(yàn),尤其是WGA、PCR和測(cè)序等對(duì)污染敏感的試驗(yàn)。
以30 μL反應(yīng)體系為例,其他體系各成分用量按比例調(diào)整。在離心管中加入3 μL溶液A、2-5 μg DNA樣品、1 μL溶液B、1 μL溶液C,補(bǔ)水到30 μL,37℃保溫16小時(shí),可電泳檢查去除效果。65℃保溫10分鐘滅活酶,然后用微量核酸沉淀劑沉淀回收環(huán)狀DNA。