本產品在柱式細菌DNAOUT(CAT#:60802)基礎上改良而得的大提升級產品,主要用于大量快速從各種革氏陽性和革氏陰性細菌材料中提取基因組DNA。跟柱式細菌DNAOUT相比,它具有下列特點:
1. 處理量大,一次可以處理30 mL的飽和菌液。
2. 純度高,OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制劑,得到的DNA可以 不經(jīng)稀釋直接用于酶切、PCR、 real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting等各種后續(xù)分子生物學實驗。
3. 產率一般在5 μg/mL細菌樣品。離心吸附柱最大吸附量為200 μg。
4. DNA片段長度一般在20-40 Kb左右。
5. 適用范圍廣,適用于絕大多數(shù)常見的細菌材料。
對革氏陰性細菌:將30 mL過夜培養(yǎng)的細菌在50 mL離心管中離心沉淀,棄上清,加入6 mL溶液A,吹打均勻后加入3 mL 溶液B,顛倒混勻,加入5 mL自備氯仿,振蕩混勻3分鐘,室溫離心5分鐘,轉移上清到新的50 mL離心管中,加入1.5倍體積的溶液C和溶液D的混合溶液,混勻后轉移到大提離心吸附柱中,室溫放置3-5 分鐘,離心2分鐘,用10 mL通用洗柱液洗2次后,用1 mL通用預洗脫液洗1次,加1 mL DNA洗脫液洗脫即得細菌基因組DNA溶液。對革氏陽性細菌:增加一步溶菌酶預處理步驟,其余相同。
用本產品提取30 mL DH5α E.coli 的基因組DNA,最后用1 mL DNA洗脫液洗脫四次, 各取10 μL上樣,在0.8%瓊脂糖凝膠和1×SuperBuffer-2中300 V電泳5分鐘后直接在UV燈下照相。使用的染料是綠如藍。DNA 產量是160 μg,OD260/280是1.74(實驗編號:305083)。