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革氏陽性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout

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本試劑盒是用于革氏陽性細(xì)菌(G+)質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。G+

體先經(jīng)堿裂解法處理,再通過離心吸附柱,專一結(jié)合DNA,最后洗去雜質(zhì),高效快

速提取質(zhì)粒DNA,全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。其操作流程如下:

​​

使用本試劑盒可從1-5 mL過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)20 μg的高純度質(zhì)粒

DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測序及PCR等。

1. 快速、步驟少,整個操作在半個小時之內(nèi)完成。

2. 不需要預(yù)平衡離心吸附柱。

3. 洗柱液即開即用,不需要額外加乙醇。

4. 純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。

5. 產(chǎn)量高,每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 μg/mL。

6. 用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

7. 價格低,比多數(shù)國內(nèi)同類產(chǎn)品的價格更便宜。

 

將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的G+12000-15000 g室溫離心1分鐘后, 重懸于0.6 mL

溶G+菌液中,顛倒混勻5-10次后放37℃保溫至少30分鐘。12000-15000 g室溫離

心10分鐘,小心棄上清。用和0.25 mL溶液A重懸沉淀,再與0.25 mL溶液B混勻,

再加入0.35 mL溶液C,混勻,室溫靜止2分鐘,離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到DNA

純化柱中,靜置2分鐘,離心1分鐘,棄收集管中的廢液,加入0.5 mL的通用洗柱

液,離心1分鐘,棄廢液,重復(fù)上一步1次。離心1分鐘,甩干殘留液體,將DNA純

化柱置于新的1.5 mL離心管(自備)中,加入適量(30—100 μL)DNA洗脫液離

心即得質(zhì)粒DNA。

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