產品及特點

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，通過獨特的內毒素清除劑選擇性結 合離心除去內毒素，然后離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低 pH 值狀態(tài)下選擇性地 結合溶液中的質粒 DNA ，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除 ，最 后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質粒 DNA 從硅基質膜上洗脫 。操作簡單 ，只 在經典的柱式質粒 DNA 提取前 ，增加菌體內毒素清除一步。

1.    離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附

量差異極小 ，可重復性好 �？朔�了國產試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。

2.    獨特工藝配方清除內毒素 ，  內毒素含量極低  (<0. 1 EU/μg DNA) ，細胞轉染效

果極佳 。也可直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序、等各種分子生物學

實驗。

規(guī)格及成分

試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：

成 份

保存

編 號

大紙盒包裝

平衡液

室溫

90901

5ml

RNase A  (10mg/ml)

-20℃

60205a

150µl

溶液 P1

4℃

60205b

15 ml

溶液 P2

室溫

60205c

15 ml

溶液 N3

室溫

3160

15 ml

去蛋白液 PE

室溫

90303

16 ml

第一次使用前按說明

加指定量乙醇

內毒素清除劑

-20℃

60408

5 ml

漂洗液 WB

室溫

1 1 1205

13 ml

第一次使用前按說明

加指定量乙醇

洗脫緩沖液 EB

室溫

1 1 1206

15 ml

吸附柱 AC

室溫

1 1 1207

50 個

收集管 (2ml)

室溫

1 1 1208

50 個

使用手冊

81107sc

1 份

運輸及保存

本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

內毒素清除劑常溫運輸 ，  4 度可以保存一個月 ，長期保存放-20℃。

儲存事項：

1.   RNaseA 保存在即用型甘油緩沖液中 ，常溫運輸 ，收到后 ，不超過 25℃室溫至 少保存 6 個月 ，  4 ℃保存 12 個月 ，長期保存放－20℃。

2.   第 一 次 使 用 時 ，  將 試 劑 盒 所 帶 的 全 部 RNase A 加 入 溶 液 P1 后  (終 濃 度 100ug/ml)  置于 2-8 ℃保存 。如果溶液 P1 中 RNase A 失活 ，提取的質�？� 能會有微量 RNA 殘留 ，在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。

3.      環(huán)境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會析出渾濁或者沉淀，可在 37℃水浴加熱幾

分鐘 ，  即可恢復澄清 ，不要劇烈搖晃 ，  以免形成過量的泡沫。

4.      避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH 值變化 ，各溶液使用后應及

時蓋緊蓋子。

使用方法

操作步驟：  (實驗前請先閱讀注意事項)

提示：

    第一次使用前請先在漂洗液 WB 瓶中加入指定量無水乙醇 ，充分混勻 ，  加

入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇 ，  以免多次加入!

    將 RNase A 全部加入溶液 P1 中 ，混勻 ，每次使用后置于 2-8 ℃保存。

1.   取 1.5-4.5 ml 過夜培養(yǎng)的菌液 ，  12,000 rpm 離心 30 秒 ，盡可能的倒干上清， 收集菌體。

收集超過 1.5 ml 菌液 ，   可以離心棄上清后 ，在同一個 1.5ml 管內加入更多的 菌液 ，重復步驟 1 ，直到收集到足夠的菌體。

2.   用 250μl 溶液 P1 重懸菌體沉淀 ，渦旋振蕩至徹底懸浮。

如果有未徹底混勻的菌塊 ，會影響裂解 ，導致提取量和純度偏低。

3.   加 250μl 的溶液 P2 ，溫和地上下翻轉 6 -8 次使菌體充分裂解 ，室溫放置 4 分 鐘。

溫和地混合 ，不要劇烈震蕩 ，  以免基因組 DNA 剪切斷裂！  所用時間不應超過 5 分鐘！以免質粒受到破壞 。此時菌液應變得清亮粘稠，如果菌體少，很快清亮粘 稠后就可以做下一步 ，不是一定要準確的 5 分鐘。

4.   加 250μl 溶液 N3 ，立即溫和地上下翻轉 6 -8 次 ，充分混勻時會出現(xiàn)白色絮狀 沉淀 。  12,000 rpm 離心 10 分鐘 ，小心取上清至新管 ，避免吸取到漂浮白色沉 淀。

加入溶液 N3 后應該立即混勻 ，  以免產生 SDS 的局部沉淀。

5.   加入 0. 1 體積(上清的體積的 10%，約 80µl)的內毒素清除劑到上一步所得上清， 顛倒旋轉混勻，冰浴或者插入碎冰中(或冰箱冷凍室)放置 5 分鐘直到渾濁變清亮 透明  (或仍舊稍有渾濁) ，  中間偶爾混勻幾次。

內毒素清除劑加入上清后，上清會變得渾濁，但是冰浴后應恢復清亮(或稍渾濁) 。

6.   常溫放置 3-5 分鐘 ，溫度恢復室溫溶液很快變?yōu)闇啙?，顛倒混勻。

如室內溫度較低或者想加快速度可以在 37-42℃水浴 ，將很快變渾濁 ，顛倒混 勻。

7.   室溫 12,000 rpm 離心 10 分鐘分相  。  上層水相含 DNA ，  下層藍色油狀相含 內毒素和其它雜質 。將含 DNA 的上層水相轉移到新管  (注意不要吸到藍色油狀 層 ，里面含內毒素等雜質) ，棄油狀層。

平衡液預處理吸附柱：

使用平衡液預處理硅膠膜吸附柱為必做步驟，具體方法參見前文“關于平衡液的

使用”

8.   向上層水相中加入 0.5 體積異丙醇  (約 370µl)  后充分顛倒混勻后分兩次  (每 次不超過 700µl)  轉入吸附柱 AC 中  (吸附柱放入收集管中) ，  12,000 rpm 離 心 1 分鐘 ，倒掉收集管中的廢液 。直到所有混合溶液通過此吸附柱。

9.   加入 500μl 去蛋白液 PE ，  12,000 rpm 離心 30 秒 ，棄廢液。

此步驟為了去除痕量核酸酶等雜質 ，如所用菌株為 JM 系列、  HB101 等 endA 菌株或野生型菌株 ，核酸酶含量豐富 ，應加此步驟；  如所用菌株為 XL- 1 Blue、 Top10 和 DH5α等缺陷型菌株 ，核酸酶含量低 ，則可略過此步驟。

10. 加入 600μl 漂洗液 WB  (請先檢查是否已加入無水乙醇!) ，  12,000 rpm 離心

30 秒 ，棄掉廢液 。再加入 600μl 漂洗液 WB ，重復漂洗一次。