蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100X) (Protease inhibitor cocktail for mammalian cell and tissue extracts, 100X) 是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物(105mM AEBSF, 80μM Aprotinin, 5mM Bestatin, 1.5mM E64, 2mM Leupeptin and 1.5mM Pepstatin A in DMSO)，并提供獨(dú)立包裝的0.5M EDTA。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織提取物中含有許多內(nèi)源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易導(dǎo)致提取物中的蛋白降解或去修飾，從而影響后續(xù)的蛋白檢測(cè)。因此在提取物中添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌�、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法�?br />本產(chǎn)品為經(jīng)優(yōu)化和測(cè)試的用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物，包含了廣譜的絲氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制劑、以及氨基肽酶抑制劑。具體組分與Sigma、Thermo及Millipore同類產(chǎn)品的比較見表1。
表1. 蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100X)與Sigma、Thermo及Millipore同類產(chǎn)品的比較：
| 品牌 | Beyotime | Sigma | Thermo | Millipore |
| 產(chǎn)品編號(hào) | P1010/P1011 | P8340 | 87786 | 539134 |
| 產(chǎn)品形式 | 100X | 100X | 100X | 100X |
| AEBSF | 105mM | 104mM | 100mM | 100mM |
| Aprotinin | 80μM | 80μM | 80μM | 80μM |
| Bestatin | 5mM | 4mM | 5mM | 5mM |
| E64 | 1.5mM | 1.4mM | 1.5mM | 1.5mM |
| Leupeptin | 2mM | 2mM | 2mM | 2mM |
| Pepstatin A | 1.5mM | 1.5mM | 1mM | 1mM |
| EDTA | 0.5M | 0.5M | 0.5M | - |
本蛋白酶抑制劑混合物含105mM AEBSF, 80μM Aprotinin, 5mM Bestatin, 1.5mM E64, 2mM Leupeptin, 1.5mM Pepstatin A(參考表1)，配制在高純度DMSO中。EDTA為單獨(dú)包裝，以便選擇性使用。如用于檢測(cè)金屬蛋白酶活性，則不宜添加EDTA。
本產(chǎn)品使用便捷，通常以1:100的比例分別把蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100X)和0.5M EDTA加入裂解液中，即可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。
不同類型的蛋白提取物中含有不同類型的蛋白酶。例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物中通常含有高豐度的絲氨酸蛋白酶，細(xì)菌細(xì)胞提取物通常含有較多的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶，哺乳動(dòng)物組織提取物中主要含有絲氨酸、半胱氨酸和金屬蛋白酶，植物提取物中常含有大量的絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶，還有一些含有天冬氨酸蛋白酶。為此針對(duì)不同類型樣品的蛋白提取，提供了不同類型的蛋白酶、磷酸酶等抑制劑混合物以供選擇，具體請(qǐng)參考附表1。
本產(chǎn)品可以有效抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性，如絲氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、蘇氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等。其中AEBSF是一種水溶性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑，其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纖溶酶(plasmin)、激肽釋放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作為PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Aprotinin是絲氨酸蛋白酶的競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制劑；Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑；E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑；Leupeptin是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制劑；Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制劑；EDTA作為螯合劑是金屬蛋白酶的可逆抑制劑。各種抑制劑的具體信息請(qǐng)參考附表2。
一個(gè)包裝的本產(chǎn)品通常足夠用于100ml裂解液的配制。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P1010-1 | 蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100X) | 1ml |
| P1010-2 | 0.5M EDTA, pH 8.0 | 1ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。4℃保存，2個(gè)月有效；室溫保存2周有效。
注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品可以適當(dāng)分裝后保存，并應(yīng)在臨使用前添加到裂解液等適當(dāng)溶液中。
本產(chǎn)品提供了獨(dú)立包裝的EDTA，可以選擇性使用。例如，后續(xù)用于檢測(cè)提取液中金屬蛋白酶活性，則不宜添加EDTA。
本產(chǎn)品中含有的蛋白酶抑制劑對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。br /> 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 本蛋白酶抑制劑混合物為100X的儲(chǔ)存液，使用時(shí)按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物)，混勻后即可使用。含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，不宜配制后凍存待后續(xù)使用。根據(jù)需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。待所需的抑制劑添加完畢并混勻后，就可以開始進(jìn)行哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織的裂解和蛋白提取。
