產(chǎn)品簡介：
外源基因?qū)胝婧思毎姆椒ㄓ泻芏喾N，如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法、 DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體法、電穿孔法、顯微注射法等。磷酸鈣法細胞轉(zhuǎn)染試劑盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在傳統(tǒng)的磷酸鈣細胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進行了改良，提高了轉(zhuǎn)染效 率，并降低了毒性，可用于磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細胞，不僅可以瞬時表達，也可以篩選穩(wěn)定株。 HEK293 是最適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細胞之一，優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達 85%以上，一般的轉(zhuǎn)染效率可達 40～50%左右。其他常見細胞(例如 Hela、CHO 細胞等)也適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染，但效率比 293 細胞要略低一些。本轉(zhuǎn)染試劑盒主要適合于大多數(shù)貼壁細胞的轉(zhuǎn)染，也可于一些懸浮細胞的轉(zhuǎn)染，一般要求 DNA 濃度在 10～50μg 為宜，Hela、BALB 等細胞沉淀放置 16h，CHO、DUKX、BⅡ等細胞可以通過甘油、DMSO 進行熱休克處理以提高轉(zhuǎn)染效率。
產(chǎn)品組成：
試劑(A): Calcium chloride solution
試劑(B): BBS solution
自備材料：
1、胰蛋白酶消化液
2、完全培養(yǎng)基
3、PBS
4、無菌水
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁細胞轉(zhuǎn)染：
1、在轉(zhuǎn)染前 24h 用胰蛋白酶消化培養(yǎng)細胞，取適量對數(shù)期細胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中，待細胞密度達 70～80%即可進行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按 6 孔板計算，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2、在加入 DNA 之前 2～4h，加入 2ml 不含抗生素的完全培養(yǎng)液，置于 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3、取 2～6μg DNA(體積不宜超過 20μl)加入 100μl Calcium chloride solution，混勻，
即為 DNA-CaCl2溶液。
4、取 BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打 BBS solution，一邊逐滴加入 DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在 1～2min)。
5、室溫靜置 20～30min，即為 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此時可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
6、取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物質(zhì)均勻加入到 6 孔板細胞中，輕輕晃動混勻。
7、置于 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 4～16h。如果培養(yǎng)細胞為 CHO、DUKX 等，可以 DMSO 或甘油進行休克處理，轉(zhuǎn)染效率會大大增加，即培養(yǎng) 4～6h 后，用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO 的完全培養(yǎng)液替換當前培養(yǎng)液，室溫下靜置 3min，加 5ml PBS 搖動混勻。
8、去除培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 2 次，加入 2ml 完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般 24h 后可見 轉(zhuǎn)染細胞的表達。
(二)懸浮細胞轉(zhuǎn)染：
1、低速離心收集懸浮細胞，用 PBS 洗滌 1 次。
2、取 2～6μg DNA(體積不宜超過 20μl)加入 100μl Calcium chloride solution，混勻， 即為 DNA-CaCl2溶液。
3、取 BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打 BBS solution，一邊逐滴加入 DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在 1～2min)。
4、室溫靜置 20～30min，即為 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此時可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
5、每 10 個細胞沉淀用 100μl DNA-CaCl2-BBS 溶液重新懸浮，室溫放置 20～30min。
6、6 孔板6每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培養(yǎng)基，取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物質(zhì)均勻 加入到 6 孔板中，輕輕晃動混勻。
7、置于 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 4～16h，去除培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 2 次，加入 2ml 完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般 24h 后可見轉(zhuǎn)染細胞的表達。
注意事項：
1、 注意無菌操作，盡量避免污染，同時 DNA 不應(yīng)含有蛋白和酚。
2、 休克處理某些細胞系會使轉(zhuǎn)染效率大大提高，但應(yīng)注意甘油暴露過久易導致細胞死亡。
3、 轉(zhuǎn)染 12～24h 后，可以加入終濃度為 10mmol/L 的丁酸鈉溶液，可以提高病毒滴度。
4、 BBS solution 的 pH 值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免長時間暴露在空氣中，以免被 空氣中的二氧化碳酸化。
有效期： 6 個月有效。
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