生產的抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒(Tartrate Resistant Acid Phosphatase Assay Kit)是一種用于快速、便捷地檢測細胞或組織樣品的裂解或勻漿產物的上清液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性的試劑盒。

酸性磷酸酶(Acid Phosphatase)，也稱酸性磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家
族，哺乳動物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分為兩類，一類為抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)，一類為抗氟離子酸性磷酸酶。
抗酒石酸酸性磷酸酶是一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細胞(osteoclast)和破軟骨細胞(chondroclast)中高表達。在活化的巨噬細胞和神經元中也有表達。抗酒石酸酸性磷酸酶在細胞信號轉導、細胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧產生和鐵離子轉運等有關�？咕剖�酸酸性磷酸酶可以被破骨細胞釋放到血液中，幾乎被認為是是機體破骨活性的唯一血液指標。
在一些疾病狀態(tài)下，如白血病性網狀內皮組織增生癥(leukaemic reticuloendotheliosis)、戈謝病(Gaucher's disease)、艾滋病導致的腦病(HIV-induced encephalopathy)、破骨細胞瘤(osteoclastoma)、骨質疏松(osteoporosis)和代謝性骨疾病

保存條件：
-20℃保存，一年有效。顯色底物和p-nitrophenol溶液需避光保存。
注意事項：
如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應時必須注意精確計時。此時推薦采用孵育30分鐘等較長的時間，以減小操作過程中的時間誤差。同時如果樣品中酶活性較高，則可以預先適當稀釋樣品。
樣品溶液中須避免出現(xiàn)各種酸性磷酸酶抑制劑。
一管顯色底物配制后需當日使用完畢，因此請注意適當多準備一些樣品一起檢測，以避免試劑盒浪費。
p-nitrophenol溶液對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。反應終止液有腐蝕性，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或腐蝕其他物品。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 試劑準備：將所有試劑取出，恢復至室溫使用。
a. 顯色底物溶液：取一管顯色底物，溶解于2.5ml的檢測緩沖液中，充分溶解和混勻，冰上放置。新鮮配制的顯色底物溶液需在6小時內使用。
b. 標準品工作液：取10μl p-nitrophenol溶液(10mM)，用檢測緩沖液稀釋至0.2ml，最終濃度為0.5mM。
2. 樣品準備：
a. 細胞或組織裂解液的準備：采用適當細胞或組織裂解液裂解細胞或組織，建議使用的P0013J Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)裂解相關樣品。如果有必要需進行適當勻漿，隨后離心取上清，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測。注意：裂解液中不能含有磷酸酶抑制劑。樣品可以-80℃凍存，但需避免反復凍融。
b. 血漿、血清和尿液的準備：血漿和血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，但為了消除樣品本身顏色的干擾，需設置加了血漿或血清但不加底物的對照。尿液通常也可以直接用于測定。上述樣品可以-80℃凍存，但需避免反復凍融。
c. 樣品的稀釋：如果樣品中含有較高活性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶，可以使用原有的裂解液或PBS等進行稀釋，也可以采用試劑
盒中的檢測緩沖液進行稀釋。如果使用試劑盒中提供的檢測緩沖液進行稀釋，需注意保留足夠的檢測緩沖液用于試劑盒的檢測過程。
3. 參考下表使用96孔板設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔。標準品的用量分別為4、8、16、24、32和40微升，樣品通�？梢灾苯蛹�40微升。如果樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行孔或三復孔。

4. 用槍頭輕輕吹打混勻，也可借助搖床進行混勻。
5. 37℃孵育5-10分鐘。(說明：待測樣品中酒石酸酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至30分鐘)
6. 每孔加入160μl反應終止液終止反應。此時，標準品或有酒石酸酸性磷酸酶活性的孔會呈現(xiàn)不同深淺的黃色。
7. 在405nm測定吸光度。如果不能測定405nm，也可以在400-415nm范圍內檢測吸光度。如果不能立即測定，可以在數(shù)小時內完成測定，所顯現(xiàn)的黃色在數(shù)小時內穩(wěn)定。
8. 酸性磷酸酶活性單位的定義：在pH4.8，37℃條件下，每分鐘水解para-nitrophenyl phosphate顯色底物產生1微摩爾
p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定義為一個酶活力單位。
9. 根據(jù)酶活性定義，計算出樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。