一、產(chǎn)品概述
黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒的代謝產(chǎn)物,它們具有很強的致癌性,主要存在于谷物、堅果、棉籽以及一些和人類血液,動物飼料相關的產(chǎn)品中。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產(chǎn)物,也是一種強致癌物質(zhì)。牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。Aflatoxin M1的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC),薄層層析法(TLC)等。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。
二、適用范圍
黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒可定性、定量檢測牛奶,奶粉等樣本中的黃曲霉毒素M1。
三、試驗原理
黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒采用競爭ELISA,在微孔板上預包被黃曲霉毒素M1抗原,加入樣本(或黃曲霉毒素M1標準品溶液)及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。與樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液,讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線,即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。
四、注意事項
1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3. 每加一種試劑前需將其搖勻。
4. 反應終止液為2M鹽酸,避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件:
保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7. 試劑變質(zhì)的跡象:
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質(zhì)。
8. 在加入底物液液后,一般顯色時間為20~30min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到35min(或更長),但不得超過40min。反之,則減短反應時間。
9. 該試劑盒最佳反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。